单自发光扫描实验

一、服务简介

技术痛点与方案原理

二、服务核心优势

1. 前置组织荧光成像，成像结果与活体成像数据匹配，可完成荧光定性、灰度定量分析，快速判断造模成效；
2. 首轮全景扫描完整留存自发荧光信号，大幅降低后续蛋白染色过程中荧光淬灭风险；
3. 配套专用荧光去除设备清除背景与残留标记荧光，搭配 TSA 信号放大体系，检测灵敏度高，同源、异源各类抗体均可使用；
4. 采用 0.5 像素高精度重合算法，以 DAPI 通道为基准对齐每一轮切片扫描图像，融合画面完整精准；
5. 配套轻量化图像浏览分析工具，普通办公电脑即可读取全景文件，一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等数据，无需高端服务器。

三、完整标准实验流程

前置样本与活体验证流程

1. 动物荧光标记造模，完成活体成像验证；
2. 组织取材，纱布吸干表面水分，液氮速冻 15s，-80℃避光储存；
3. 组织短期固定（24h 内），使用荧光成像设备采集离体组织荧光图像；
4. 制备冰冻切片，DAPI 复染封片，全景扫描完整保存自发荧光原始信号。

免疫荧光多轮操作流程

1. 去除切片盖玻片；
2. 抗原修复处理；
3. 设备清除切片标记自发荧光与背景自发荧光；
4. 内源性过氧化物酶封闭；
5. 血清封闭；
6. 第一种一抗孵育；
7. HRP 标记二抗孵育；
8. iF488-TSA 荧光标记；
9. 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗；
10. 如需多蛋白标记，循环血清封闭、一抗、HRP 二抗、TSA 标记、洗脱整套流程，每轮完成后均执行 DAPI 封片、全景扫描、清除荧光基团；
11. DAPI 复染细胞核后高清全景扫描；
12. 去除盖玻片，抗体洗脱清洗切片；
13. 设备彻底清除切片残留荧光基团；
14. 软件对所有自发荧光、蛋白荧光扫描图像完成高精度融合；
15. 对融合图像开展共定位、阳性面积、阳性率等量化数据分析。

四、样本保存与运输规范

五、样本相关注意事项

1. 送检时需备注标记自发荧光种类、对应激发与发射波长，荧光波长需匹配成像设备滤光块范围，否则无法成像；
2. 组织仅可短期固定（24h 内），固定后的组织无法开展其他分子实验；若需多类型检测，需提前分切分装样本；
3. 若标记荧光药物可溶于水 / 有机试剂，需提前说明，避免固定溶解荧光物质造成实验失败；
4. 脑、脊髓等神经组织，若需 IBA-1 蛋白标记，取材后立即固定，3 日内送检；固定不及时会标记失败，固定过久会产生背景荧光干扰自发荧光观测。

六、交付成果