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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海经科化学科技有限公司
- 服务名称:
FISH(单标)+IF双标扫描全套
- 规格:
张
一、服务简介
检测技术背景
二、服务核心优势
- 同一切片完整留存核酸、两种靶蛋白多类荧光信号,规避荧光淬灭、多荧光染料互相串色干扰;
- 搭配 TSA 信号放大技术,阳性信号显著增强,检测灵敏度更高,同源、异源一抗均可使用;
- 高分辨率全景成像,以 DAPI 信号作为对齐基准,采用 0.5 像素高精度重合算法匹配每轮扫描画面,融合图像组织匹配完整、检测结果精准;
- 配套轻量化图像浏览分析软件,普通办公电脑即可读取全景文件,一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等量化参数,无需高端服务器硬件。
三、完整标准实验流程
- 样本准备
- 热修复处理
- 蛋白酶 K 消化
- 核酸片段 FISH 标记
- DAPI 复染细胞核并封片
- 切片高清全景扫描,留存 FISH 原始图像
- 拆除盖玻片,洗脱核酸探针
- 专用荧光淬灭设备清除 FISH 荧光基团
- 抗原修复
- 内源性过氧化物酶封闭
- 血清封闭
- 第一种一抗孵育
- HRP 标记二抗孵育
- iF488-TSA 荧光标记
- 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗
- 再次血清封闭,开展第二轮蛋白标记:第二种一抗→HRP 二抗→iF647-TSA 标记
- DAPI 复染细胞核、封片,执行第二轮全景扫描
- 去除盖玻片,抗体洗脱液清洗切片
- 荧光去除设备清除本轮荧光基团
- 全部轮次实验完成后,软件对所有扫描图像进行高精度融合处理
四、样本适配与送样运输规范
- 石蜡切片常温保存运输;冰冻切片 - 20℃保存运输。
- 细胞爬片、细胞滴片、细胞涂片不适用本方案:拆除盖玻片易造成细胞脱落,多轮扫描无法保证视野完全重合,图像无法正常融合。
- 实验全程切片组织形态结构必须保持不变,否则各轮扫描图像无法匹配融合。
五、交付成果
FISH(单标)+IF双标扫描全套
FISH(单标)+IF3标扫描全套
FISH(单标)+IF4标扫描全套
FISH(单标)+IF5标扫描全套
FISH(单标)+IF6标扫描全套
FISH(单标)+IF7标扫描全套
FISH(单标)+IF8标扫描全套
FISH(单标)+IF9标扫描全套
FISH(单标)+IF10标扫描全套
FISH(双标)+IF单标扫描全套
FISH(双标)+IF双标扫描全套
FISH(双标)+IF3标扫描全套
FISH(双标)+IF4标扫描全套
FISH(双标)+IF5标扫描全套
FISH(双标)+IF6标扫描全套
FISH(双标)+IF7标扫描全套
FISH(双标)+IF8标扫描全套
FISH(双标)+IF9标扫描全套
FISH(双标)+IF10标扫描全套
FISH(三标)+IF单标扫描全套
FISH(三标)+IF双标扫描全套
FISH(三标)+IF3标扫描全套
FISH(三标)+IF4标扫描全套
FISH(三标)+IF5标扫描全套
FISH(三标)+IF6标扫描全套
FISH(三标)+IF7标扫描全套
FISH(三标)+IF8标扫描全套
FISH(三标)+IF9标扫描全套
FISH(三标)+IF10标扫描全套
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文献和实验免疫荧光单标记和双标记的方法 1免疫荧光单标记方法 免疫 荧光单标记是指只标记一种蛋白质分子,方法比较简单,只要按照染色步骤去做,通常不存在太多的问题。但要注意固定液的选择,固定液选择的合适与否,可能会直接影响染色结果。具体染色方法如下。 1)所需材料与试剂 (1)培养在盖玻片或玻璃培养皿中融合程度达到60%一70%的细胞。 (2)一抗、FITC或TRITC标记的二抗。 (3)4%多聚甲醛固定液或冷
你是否苦于你纯化的标签蛋白无法达到理想纯度而日夜发愁?是否在换了新的标签后仍不太满意而承受老板们鬼畜般的霹雳大吼?朋友别哭,相信这篇文章可以为你带来纯化高纯度蛋白的新思路。 进行蛋白质功能研究的关键在于得到高纯度蛋白。习惯于构建单标签的你想必遇到过杂质太多,蛋白表达量少甚至不稳定的情况。何不根据目的蛋白性质构建双标签蛋白进行两种不同亲和层析柱的纯化?没准会有意想不到的效果。 01双标签蛋白助力于目的蛋白的高特异性 单组氨酸标签蛋白的亲和层析结果通常不能保证杂蛋白的有效去除
对照。 二、注意事项 1、荧光染色后一般在 1h 内完成观察,或于 4℃ 保存 4h ,时间过长,可能会使荧光提前衰退。 2、每次试验均需设置以下三种对照: (1) 阳性对照:阳性血清+荧光标记物; (2)阴性对照:阴性血清+荧光标记物; (3)荧光标记物对照:PBS +荧光标记物。 三、免疫荧光双标的经验之谈 1、选取一抗时,要求来源于两种不同的动物,我用的是来源于家兔和大鼠的抗体,二抗则是不同荧光信号标记的,我用的是 donkey anti-rabbit-FITC(绿)和donkey anti
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