TUNEL+IF 9标扫描 九标记共定位染色 荧光图像定量

一、服务简介

基础检测原理

1. TUNEL 凋亡检测：荧光标记 dUTP 在末端转移酶催化下，结合凋亡细胞断裂 DNA 的 3’-OH 位点，依靠荧光信号直观标记凋亡细胞。
2. 传统实验痛点：免疫荧光检测需要高温抗原修复充分暴露抗原，高温会造成 DNA 大量断裂，极易产生 TUNEL 假阳性；若先开展 TUNEL 染色再进行蛋白免疫荧光，TUNEL 荧光会在后续染色步骤发生淬灭，两项检测无法同时获得可靠数据。
3. 方案解决逻辑：将 TUNEL 凋亡标记、九种靶蛋白免疫荧光分独立轮次操作，每轮染色后单独扫描留存最佳荧光图像；全部实验完成后通过软件高精度融合所有通道。配套 TSA 酪胺信号放大技术，检测灵敏度更高，同源、异源一抗均可开展实验。

二、服务核心优势

1. 单张切片同步留存凋亡信号与九种靶蛋白荧光，有效解决多荧光叠加带来的淬灭、串色干扰问题；
2. 搭配 TSA 信号放大体系，阳性信号检出灵敏度提升，无抗体种属限制；
3. 高分辨率全景成像，以 DAPI 信号为参照，采用 0.5 像素高精度重合算法对齐每一轮扫描画面，融合图像组织匹配度高、检测结果准确；
4. 配套轻量化浏览分析软件，普通办公电脑即可读取全景图像，一键输出共定位细胞数量、阳性比率、细胞密度等量化指标，无需高端服务器硬件。

三、完整标准实验流程

1. 样本准备
2. 蛋白酶 K 消化处理
3. 凋亡细胞 TUNEL 荧光标记
4. DAPI 复染细胞核，进行封片
5. 切片高清全景扫描，留存 TUNEL 通道原始图像
6. 专用荧光淬灭设备清除切片上 TUNEL 荧光基团
7. 高温抗原修复
8. 内源性过氧化物酶封闭处理
9. 血清封闭
10. 第一种一抗孵育
11. HRP 标记二抗孵育
12. iF488-TSA 荧光标记
13. 抗体洗脱液洗脱本轮一抗、二抗
14. 循环执行血清封闭、一抗、HRP 二抗、TSA 标记、抗体洗脱整套操作，依次完成第二至第九种靶蛋白染色；每轮结束后均执行 DAPI 复染、封片、全景扫描、清除荧光基团步骤
15. 全部轮次实验结束后，软件对所有扫描图像开展高精度融合处理

四、样本适配与送样运输规范

1. 石蜡切片常温保存运输；冰冻切片 - 20℃保存运输。
2. 细胞爬片、细胞滴片、细胞涂片不适用本方案：拆除盖玻片易造成细胞脱落，多轮扫描无法保证视野完全重合，图像无法正常融合。
3. 全实验周期内切片组织形态必须保持完整一致，否则各轮图像无法完成融合匹配。

五、交付成果