禽流感病毒H8亚型(AIV-H8)核酸检测试剂盒(荧光PCR

禽流感病毒H8亚型(AIV-H8)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

预期用途
用于定性/定量检测禽类（鸡、鸭、鹅、野鸟等）咽喉拭子、泄殖腔拭子、肺 / 脾 / 脑等组织、环境样本中的禽流感病毒 H8 亚型核酸，适用于禽流感监测、流行病学调查及辅助诊断，仅供科研使用。

检测原理
采用TaqMan 探针法实时荧光 RT-PCR技术：
靶标基因：针对 H8 亚型血凝素 HA 基因保守区设计特异性引物与探针。
荧光标记：探针标记FAM（检测靶标），内标标记HEX/VIC（监控提取 / 扩增，防假阴性）。
反应过程：一步法 RT-PCR，RNA 逆转录为 cDNA 后扩增，探针结合模板并被酶切，荧光信号随扩增实时增强，仪器监测信号并判读结果。

主要组成（50T / 盒）
组分    规格    备注
2×One-Step RT-PCR Master Mix    500μL    含缓冲液、dNTP、酶系
H8 特异性引物 - 探针混合液    100μL    冻干 / 液体，FAM 标记
阳性对照（质粒）    0.5mL    10⁷拷贝 /μL，非感染性
阴性对照（无酶水）    1mL    防污染
内标（可选）    100μL    HEX/VIC 标记

性能指标
灵敏度：最低检测限 **≤100 拷贝 / 反应 **。
特异性：仅与 AIV-H8 反应，与 H5/H7/H9 等亚型、其他呼吸道病原体无交叉反应。
线性范围：10²–10⁷拷贝 / 反应，≥5 个数量级。
检测时间：≤60 分钟（样本至结果）。

适用样本与仪器
样本类型：禽类咽喉 / 泄殖腔拭子、肺 / 脾 / 脑组织、环境涂抹物、污水、细胞培养物。
适用仪器：ABI 7500、Agilent MX3000P、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler 等多通道荧光 PCR 仪。

储存与有效期
储存条件：-20℃避光，避免反复冻融（≤5 次）。
有效期：12 个月（未开封）。

结果判读（Ct 值）
阳性：Ct≤35，典型 S 型扩增曲线。
可疑：35＜Ct≤38，建议复检；复检仍可疑则判阳性。
阴性：Ct＞38 或无 Ct 值，无扩增曲线。
内标：Ct≤35，确认样本无抑制、提取有效。

操作流程
样本处理：拭子 / 组织用病毒保存液洗脱，取上清；组织匀浆后取上清。
RNA 提取：磁珠法 / 柱提法提取总 RNA，防 RNase 污染。
体系配制（25μL）：2×qPCR Mix 12.5μL + 引物 / 探针 1μL + 酶 0.5μL + 模板 RNA 5μL + 无酶水补至 25μL。
上机扩增：
UNG 处理：37℃ 2min。
预变性：95℃ 5min。
循环（40 次）：95℃ 15s；55℃ 40s（采集荧光）。
结果分析：软件自动判读，输出 Ct 值与扩增曲线。