α-淀粉酶活性检测试剂盒(EPS-G7显色法)

碧云天的α-淀粉酶活性检测试剂盒(EPS-G7显色法)，即α-Amylase Activity Assay Kit (EPS-G7 Colorimetric)，又称显色法α-淀粉酶活性检测试剂盒(α-Amylase Activity Colorimetric Assay Kit)，简称淀粉酶检测试剂盒(Amylase Assay Kit)，是一种基于亚乙基-对硝`基`苯麦芽七糖(EPS-G7)，利用吸光度检测，快速、高灵敏地对血清、血浆、尿液等生物体液、组织、细胞以及组织或细胞培养上清等样品中α-淀粉酶活性进行检测的试剂盒。通常0.5-5µl血清或血浆样品就足够用于本试剂盒的检测。

α-淀粉酶(α-Amylase, EC3.2.1.1)，全称为1,4-α-D-葡聚糖-葡聚糖水解酶(1,4-α-D-glucan glucanohydrolase)，又称Alpha-Amylase、液化型淀粉酶、液化酶、α-1,4-糊精酶、细菌性淀粉酶、α-淀粉酵素和糊精化酶，属于内切型淀粉酶。α-淀粉酶是一种糖苷水解酶，可以水解淀粉内部的α-1,4-糖苷键，水解产物为糊精、低聚糖和单糖，酶作用后可使糊化淀粉的黏度迅速降低，变成液化淀粉[1]。α-淀粉酶分子中含有一个牢固结合的钙离子，这个钙离子不直接参与酶-底物络合物的形成，其功能是保持酶的结构，使酶具有最大的稳定性和最高的活性。α-淀粉酶作用温度范围60-90ºC，最适宜作用温度为60-70ºC，作用pH值范围5.5-7.0。α-淀粉酶的来源非常广泛，包括动物、植物和微生物，在哺乳动物中，α-淀粉酶是淀粉酶的主要形式，是饮食消化的主要酶之一。正常情况下，人体中的淀粉酶主要来源于胰腺和唾液腺，但是含量相对较少。当胰腺疾病尤其是急性胰腺炎发生时，从胰管管壁及胰泡中逸出的胰淀粉酶被吸收入血液引起血中淀粉酶的含量显著升高。淀粉酶的分子量较小，约45,000Da左右，进而会被肾小球滤过出现在尿液中，又引起尿液中淀粉酶含量的升高。所以，对血液、尿液中的淀粉酶含量进行测定是临床上用来诊断胰腺疾病的常用方法。此外，α-淀粉酶也常用于研制助消化的药物，用于制备消化助剂[2, 3]。

本试剂盒的检测原理请参考图1。在α-淀粉酶的作用下，亚乙基-对硝`基苯麦芽七糖(Ethylidene-pNP-G7/EPS-G7)水解生成对硝`基苯麦芽三糖(p-Nitrophenol triose malt)/对硝`基苯麦芽四糖/对硝`基苯麦芽三糖和对硝`基苯麦芽四糖，生成的对硝`基苯麦芽三糖在α-葡萄糖苷酶(α-Glucosidase)的作用下生成葡萄糖(Glucose)和黄色的对硝`基苯`酚(p-Nitrophenol/pNP)。样品中α-淀粉酶的活性越高，催化产生的黄色的对硝`基苯`酚越多，再通过检测对硝`基`苯`酚在405nm的吸光度来最终计算样品中α-淀粉酶的活性。吸光度与样品中α-淀粉酶的活性成正比。

图1.碧云天α-淀粉酶活性检测试剂盒(EPS-G7显色法) (P0405)检测原理图。

本试剂盒检测灵敏度高，线性范围宽，样品用量少。本试剂盒提供了α-淀粉酶的反应产物对硝`基苯`酚的标准溶液，可以通过绘制标准曲线(图2A)，计算出样品中的α-淀粉酶的活性。本试剂盒在样品体积为50µl时，对硝`基苯`酚标准曲线在0.005-5mM浓度范围内有良好的线性关系，即可以检测活性低至0.167mU/ml的α-淀粉酶，α-淀粉酶在0.167-167mU/ml范围内有良好的线性关系。

图2.碧云天α-淀粉酶活性检测试剂盒(EPS-G7显色法) (P0405)用于对硝`基苯`酚标准品、阳性对照及小鼠肝脏裂解样品的检测效果。50µl不同浓度的对硝`基苯`酚标准品、阳性对照和25倍稀释的小鼠肝脏裂解样品，加入100µl Amylase检测工作液混匀，25ºC孵育30分钟，测定A405。图A为本试剂盒对标准品对硝`基苯`酚的检测效果图，在0.005-5mM浓度范围内有良好的线性关系；图B为对阳性对照(Positive Control)和约37µg蛋白量的小鼠肝脏裂解样品(Mouse Liver)的检测效果图。实际检测数据会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒能特异性检测α-淀粉酶。淀粉酶主要有3种，分别为α、β、γ淀粉酶，其适宜的反应温度、pH和酶反应产物均不相同。本试剂盒使用α-淀粉酶的特异性底物，同时经过优化，相应的Assay Buffer和pH仅适合α-淀粉酶与底物进行反应，从而保证本试剂盒特异性的仅检测α-淀粉酶。

本试剂盒检测方法灵活，检测速度快。本试剂盒可快速、简便地测量样品中的α-淀粉酶活性，整个检测过程约30分钟即可完成。

本试剂盒提供的检测裂解液有一定的通用性。使用本试剂盒中的BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay裂解获得的细胞或组织样品，也可以用于碧云天生产的其它代谢类试剂盒中同样使用BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay进行裂解的样品检测，通用性强；而且还可用于检测蛋白浓度、进行SDS-PAGE或一些较易溶解蛋白的Western检测。

本试剂盒应用范围广。本试剂盒可用于小鼠、大鼠、人等的血清、血浆、尿液等生物体液，细胞培养上清、组织或细胞样品等的检测。本试剂盒不仅适合少量样品的检测，也非常适合高通量筛选(High-throughput screening)的自动化操作系统。

按照使用说明操作，用于96孔板检测时，本试剂盒小包装和中包装分别可以进行100次和500次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
P0405S-1	BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay	20ml
P0405S-2	Amylase Assay Buffer	20ml
P0405S-3	Substrate	200μl
P0405S-4	Enzyme Solution	200μl
P0405S-5	Positive Control (50X)	50μl
P0405S-6	Nitrophenol Standard (50mM)	200μl
－	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
P0405M-1	BeyoLysis™ Buffer A for Metabolic Assay	100ml
P0405M-2	Amylase Assay Buffer	100ml
P0405M-3	Substrate	1ml
P0405M-4	Enzyme Solution	1ml
P0405M-5	Positive Control (50X)	250μl
P0405M-6	Nitrophenol Standard (50mM)	1ml
－	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。其中Substrate和Nitrophenol Standard (50mM)须避光保存。

注意事项：

Amylase Assay Buffer需要完全解冻并平衡至室温后再使用，否则会影响检测结果。其它各种溶液使用时应在冰上进行。

Nitrophenol Standard (50mM)如果有结晶析出会影响后续反应，需要在50-80ºC水浴加热10-20分钟，使其完全溶解。

血清、血浆等血液样品如果在4ºC保存，保存的时间不得超过2周，否则会影响检测结果的准确性。通常血清样品宜在-20ºC保存，-80ºC保存更佳。

Nitrophenol Standard (50mM)对人体有毒，操作时请特别小心，并确保有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。