RtcB Ligase

碧云天生产的RtcB Ligase，即RtcB连接酶，是一种可催化单链RNA分子3'末端的3'-磷酸或2', 3'-环磷酸与单链RNA分子5'末端的5'-羟基连接的酶。本产品和RtcB Ligase (High Concentration) (R0617)相比，仅酶浓度不同，其余特性相同。如果希望获得更高的连接效率，推荐尝试RtcB Ligase (High Concentration)。

RtcB Ligase主要用于单链RNA分子之间的连接或单链RNA的环化，连接时需要3'-磷酸或2', 3'-环磷酸基团和5'-羟基的存在。

RtcB Ligase也可以用于DNA (Donor)和DNA (Acceptor)、RNA (Donor)和DNA (Acceptor)之间的连接，但连接效率非常低。

RtcB Ligase主要用于3'-磷酸或2', 3'-环磷酸末端的单链RNA/DNA分子与5'-羟基末端的单链RNA分子的连接；对于单链RNA、单链DNA或单核苷酸分子间或分子内5'-P末端与3'-OH末端之间的连接，推荐使用碧云天生产的T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) (R0621)或T4 RNA Ligase (D7021)；对于双链RNA的连接，推荐使用碧云天生产的T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase) (R0632)；对于5'端预腺苷酰化的DNA或RNA (App-DNA或App-RNA)与3'端羟基的RNA的连接，推荐使用碧云天生产的T4 RNA Ligase 2, truncated (R0635)或T4 RNA Ligase 2, truncated KQ (R0637)。

RtcB Ligase的催化连接反应需GTP、MnCl2的参与，并在反应过程中生成GMP，用于底物3'-磷酸末端的活化和连接；对于末端是2', 3'-环磷酸的底物，须先将末端水解为3'-磷酸基团，再由GMP进行活化连接[1, 2]。

碧云天RtcB Ligase催化连接ssRNA的效果请参考图1。

图1.碧云天RtcB Ligase (R0616)催化连接ssRNA的效果图。在20µl反应体系(50mM Tris-HCl，75mM KCl，3mM MgCl2，10mM DTT (pH 8.3 @ 25ºC) )中加入10pmol长度为20nt的ssRNA (5'-OH-UGGCUCCGAUAUCACGCUUCp-3')，适量BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)，以及最终浓度为图中所示的本产品或N公司(Competitor)的RtcB Ligase，37ºC孵育1小时进行反应。取反应后产物5μl，加入5μl DNA/RNA Loading Buffer (2X, for Denaturing PAGE) (R0212)，进行15%变性聚丙·烯·酰胺凝胶电泳(180V电泳60分钟)，随后使用NA-Red (EB升级换代产品，2000X) (D0128/D0130)室温染色5分钟，在紫外灯下观察实验结果。如图所示，本产品与N公司的RtcB Ligase产品相比，具有类似的连接ssRNA的效果。Inter-ligated product为分之间连接的产物，Intra-ligated product为分子内连接形成的环形小RNA。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

用途：用于末端为3'-磷酸或2', 3'-环磷酸的ssRNA或ssDNA分子与末端为5'-羟基的ssRNA的连接；ssRNA的环化；使用标记探针检测末端为3'-磷酸、2', 3'-环磷酸或5'-羟基的RNA。

来源：纯化自携带编码大肠杆菌RtcB Ligase基因的E.coli重组菌株。

纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNA酶，不含磷酸酯酶。

酶储存溶液：10mM Tris-HCl, 50mM NaCl, 1mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol (pH 7.4 @ 25ºC)。

10X Reaction Buffer：500mM Tris-HCl, 30mM MgCl2, 750mM KCl, 100mM DTT (pH 8.3 @ 25ºC)。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
R0616S-1	RtcB Ligase (15µM)	25µl
R0616S-2	10X Reaction Buffer	60µl
R0616S-3	GTP (1mM)	60µl
R0616S-4	MnCl2 (10mM)	60µl
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
R0616M-1	RtcB Ligase (15µM)	100µl
R0616M-2	10X Reaction Buffer	250µl
R0616M-3	GTP (1mM)	250µl
R0616M-4	MnCl2 (10mM)	250µl
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
R0616L-1	RtcB Ligase (15µM)	500µl
R0616L-2	10X Reaction Buffer	1.2ml
R0616L-3	GTP (1mM)	1.2ml
R0616L-4	MnCl2 (10mM)	1.2ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，至少一年有效。

注意事项：

本产品提供的试剂均用不含DNA酶和RNA酶的水配制，可直接用于3'端为磷酸或2', 3'-环磷酸的ssRNA/ssDNA和5'端为羟基的ssRNA之间的连接反应。

本产品连接的底物需要确保5'末端是羟基，同时3'末端是磷酸或2', 3'-环磷酸。此外，反应体系中必须加入GTP、MnCl2。

如果连接底物为双链RNA或DNA，推荐使用碧云天生产的T4 RNA Ligase 2 (dsRNA Ligase) (R0632)等系列产品。

如果连接底物是5'末端磷酸化或腺苷酰化、3'末端是羟基的ssRNA或ssDNA，推荐使用碧云天生产的T4 RNA Ligase 1 (ssRNA Ligase) (R0621)等系列产品。

可根据具体应用选择合适的操作方法，可能需准备额外的试剂，如碧云天生产的RNase inhibitor (R0101/R0102/R0105/R0106)、DEPC水(DNase、RNase free) (R0021/R0022)、BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)等。

使用本产品进行连接反应时，如果底物过多或过少，在反应体系中加入PEG8000至终浓度为15%很多情况下可以显著提高连接效率，同时不影响反应特性。推荐使用PEG8000 (50%, RNase free) (R0056)。

本产品使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20ºC保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。