Tris抗原修复液 (10×, pH 9.5)，BioRea

IHC原理、操作及注意事项

免疫组织化学（Immunohistochemistry，IHC）是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的一项技术。 IHC 的实验流程和方法总体不难，但做出漂亮的染色结果却不容易，所谓“细节决定成败”，也正是IHC 实验中尤为重要的关键点。那么“细节”主要是哪一些呢？下面就为您一一道来。（以石蜡组织切片为例介绍） 标本固定 固定的目的除了使细胞内的蛋白质凝固，减少

IHC/ICC样本的适当固定

所有用于免疫组化/免疫细胞化学实验的样本都必须进行固定，以保持组织形态并保留靶分子的抗原性。固定会改变组织的化学成分，通常需要在保持组织结构和保留抗原表位之间做出权衡。细胞或组织固定不完全（固定不足）可能导致组织内靶蛋白快速蛋白水解降解，从而降低特异性免疫反应性。然而，过度固定（固定过量）可能导致抗原表位被掩盖或产生强烈的非特异性背景染色，从而掩盖特异性标记。固定方法和时间的选择必须结合样本制备进行考虑。此外，固定时间、温度和pH值都会影响固定程度。 甲醛 甲醛是用于保存组织和细胞内蛋白质靶

IHC 实验操作步骤

免疫组化方法（石蜡切片）*重要提示：参考抗体说明书选用合适的抗体稀释液和抗原修复处理方法。IHC 方法：抗原修复缓冲液/抗体稀释液A. 所需溶液和试剂1. 二甲苯2. 无水乙醇（100% 和 95%，变性无水乙醇，组织学级）3. 去离子水（dH2O）4. 苏木精（可选）5. 漂洗（缓冲）液：1X TBS/0.1% Tween-20 (1X TBST)：配制时，取 100 ml 10X TBS 加 900 ml 水稀释至 1 升。加入 1 ml Tween-20，混匀。10X Tris