真菌基因组DNA快速提取试剂盒

产品描述：

本试剂盒采用DNA吸附柱和新型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快速简单地提取基因组DNA。可在30分钟内完成一个或多个100mg新鲜或20mg干燥的真菌样品DNA的纯化工作。提取过程不需要用到有毒的酚氯仿等有机物抽提，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等杂质，纯化的DNA可直接用于PCR、酶切和杂交等实验。

新鲜或干燥的真菌组织（细胞）磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片被沉淀去除；然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗、离心的步骤，进一步将多糖、多酚和细胞代谢物、蛋白等杂质去除， 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。

 

产品特点：

1.不使用有毒的ben酚，氯仿等试剂。

2.简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 1.7～1.9，长度可达30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot 和各种酶切反应。

 

产品组分：

 

组分	保存	50T	100T	200T
蛋白酶K（20mg/mL）	4℃	1.25mL	2×1.25mL	4×1.25mL
Buffer ATL	室温	14mL	28mL	56mL
Buffer AL	室温	12mL	24mL	48mL
Buffer AW1	室温	20mL 第一次使用前请加入13mL无水乙醇	40mL 第一次使用前请加入26mL无水乙醇	80mL 第一次使用前请加入52mL无水乙醇
Buffer AW2	室温	13mL 第一次使用前请加入30mL无水乙醇	26mL第一次使用前请加入60mL无水乙醇	52mL第一次使用前请加入120mL无水乙醇
Buffer AE	室温	10mL	20mL	50mL
离心柱和收集管	室温	50套	100套	200套

 

运输和保存： 

1、本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。

2、试剂盒储存于低温（4℃或者-20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

3、避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

 

使用前必读：

1、实验过程使用的离心机均可在室温进行（4℃也可以），转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机

2、需要自备乙醇、1×PBS、RNase A（100mg/mL）等。

3、样品处理量不能超过离心柱的处理能力，否则容易导致DNA产量降低。

4、ATL、AL和AW1中含有刺激性化合物，操作时务必戴手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5、开始实验前将需要的水浴先预热到 56℃备用。

6、真菌种类复杂，没有一种试剂盒可以提取所有种类的真菌DNA。如果某些真菌多糖多酚含量过于丰富、次级代谢产物太复杂导致本试剂盒效果不佳，可以选择本公司的HRN0544 CTAB法植物DNA提取试剂盒提取真菌，一般该试剂盒对于多糖多酚次级代谢产物复杂的真菌DNA提取效果良好。

7、本产品仅作科研用途！

 

使用方法：

提示：

→第一次使用前请先在 Buffer AW1，Buffer AW2中添加指定量的无水乙醇，并做好标记！

 

1、取适量真菌组织（新鲜组织100 mg 或干重组织30 mg）在研钵中加入液氮充分碾磨成细粉。

2、转移细粉到一个1.5mL离心管。

3、加入25μL的Proteinase K到上述离心管中，充分混匀，再加入200μL 的Buffer AL，立刻涡旋振荡充分混匀，在56℃孵育30min。如果RNA残留较多，需要去除RNA，可在加入Buffer AL之前加5μL RNase A（100mg/mL）溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。

4、加入200μL无水乙醇到样品中，涡旋振荡充分混匀。

5、将上述混合液加入到组装好的（离心柱放入收集管中）离心柱中，12,000rpm离心1min，弃废液。

6、加入500μL的Buffer AW1，12,000rpm离心30s，弃废液。

7、加入500μL的Buffer AW2，12,000rpm离心30s，弃废液。

8、重复一遍步骤7。

9、将离心柱放回空的收集管中，12,000rpm离心2min，尽量去除残留液体，以免影响下游反应。

10、将离心柱放入一个新的1.5mL离心管中，向离心柱膜的中央加入100-200μL Buffer AE（Buffer AE可事先在80℃下预热，以提高DNA产量），室温放置3min，12,000rpm离心1min。洗脱体积越大、洗脱效率越高，本试剂盒最小洗脱体积不应该低于50μL。

11、可将步骤9中洗脱所得的溶液重新加入离心柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min，可以提高DNA的浓度。（该步骤为可选步骤）