真菌基因组DNA快速提取试剂盒
中文名:真菌基因组DNA快速提取试剂盒
英文名:Fungal gDNA Extract Kit
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:RT
产品说明:
本产品通过玻璃珠破碎或者液氮研磨菌体等物理方法,辅以强效的化学裂解液高效裂解真菌细胞壁,无需蜗牛酶等破壁酶长时间酶解细胞壁过程。单组样品提取可在30 min内完成。提取的DNA没有蛋白质以及盐离子污染,可直接用于酶切,PCR等后续实验。
操作步骤:
(一)菌体收集
1. 菌液集菌:取3-5 mL过夜培养的菌液(OD600一般在1以上)到离心管中,12,000 rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀(1.5 mL离心管需离心3-4次收集菌体)。
2. 菌落集菌:用接种针或枪头在培养基上刮取尽可能多的菌落,转移到装有1 mL无菌水的离心管中,洗下接种针或枪头上的菌体。12,000 rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀。
3. 洗涤菌体:在菌体沉淀中加入无菌水1 mL重悬菌体, 12,000rpm离心2 min弃上清留菌体沉淀。
(二)菌体裂解:
1. 玻璃珠破碎:在菌体沉淀中加入500 μL裂解液I和0.5 g的玻璃珠,常温涡旋震荡10 min。
注:此步也可液氮研磨:将菌体沉淀放入研钵中,加入液氮研磨成粉后转移到新的离心管中,再加入
500 μL裂解液I,常温涡旋震荡3分钟。
2.在含裂解产物的离心管中加入500 μL裂解液II,涡旋震荡3 min,12,000 rpm离心2 min,将分层后的上清液全部转移到一个5 mL的离心管中。
注意:下层为浅黄色有机蛋白相(玻璃珠在管底),上层为澄清或者乳白色水相,水相含基因组DNA,小心吸取,避免触及有机相。
(三)基因组DNA收集:
1. 在步骤(二)所得的上清中加入3倍体积的结合液III,颠倒数次混匀后,分三次上DNA吸附柱,每次上柱后均先室温放置2 min,然后12,000 rpm离心1 min,倒掉穿透液。
2. 在吸附柱中央加入500 μL洗涤液,12,000 rpm离心1 min,弃穿透液。
3. 再将吸附柱12,000 rpm离心30 s以甩干乙醇。
4. 将吸附柱放入一个1.5 mL离心管中。在吸附柱中央加入50 μL洗脱液(65-70 ℃预热),室温静置2 min。12,000 rpm离心2 min。将穿透液重新加入吸附柱中央,12,000 rpm离心1 min以洗脱更多基因组DNA。
5. 检测DNA质量。将所得的基因组DNA保存于-20 ℃冰箱。
注意事项:
1.如需大量提取,可以增加样品处理量,具体操作可咨询本公司。
2.为了您的个人健康,请戴手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!