- ￥60 - 3500
- 经科
- JK5430
- 国产
- 2026年03月23日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
现货
- 英文名：
2×HotStart Fast PCR Master Mix (With Dye)
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1mL/5×1mL/50×1mL/100×1mL
| 规格： | 1mL | 产品价格： | ￥60.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5×1mL | 产品价格： | ￥250.0 |
| 规格： | 50×1mL | 产品价格： | ￥2000.0 |
| 规格： | 100×1mL | 产品价格： | ￥3500.0 |
产品简介
本品含有经过抗体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase，添加强力延伸因子以及优化的缓冲体系，具有超高的扩增效率，十分适用于大肠杆菌、农杆菌、酵母菌等大多数菌落PCR扩增。本产品3 kb以内基因组等复杂模板扩增的延伸速度可达1 sec/kb，3-6 kb片段扩增速度可达3 sec/kb，6-10 kb片段扩增速度可达5 sec/kb，10 kb以上片段扩增速度可达10 sec/kb；6 kb以内质粒等简单模板扩增速度可达1 sec/kb，可大幅节省PCR反应时间。同时，Mix中含有dNTPs、Mg2+，使用时只需加入引物和模板即可进行扩增。此外，Mix中含有红色示踪染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。体系中加入的保护剂使得本产品经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。
产品储存
-25~-15℃储存，有效期2年。
操作注意
1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2.本产品仅作科研用途！
操作说明
1.推荐PCR反应体系
表1 PCR反应体系
|
组分 |
体积（μL） |
体积（μL） |
终浓度 |
|
2×HotStart Fast PCR Master Mix (With Dye)* |
25 |
12.5 |
1× |
|
模板** |
x |
x |
- |
|
正向引物F（10 μM）*** |
2 |
1 |
0.4-0.5 μM |
|
反向引物R（10 μM）*** |
2 |
1 |
0.4-0.5 μM |
|
ddH2O |
Up to 50 |
Up to 25 |
- |
【注】：使用前请务必将其彻底混匀。
1)*在1×预混液中含有2 mM Mg2+和200 μM的dNTPs，使用前要充分解冻混匀。
2)**大肠杆菌及农杆菌可直接吸取菌液或挑菌上样；酵母菌菌液及菌株建议煮沸5 min后放入-80℃冰箱3 min，待解冻后上样；注意菌液样本需震荡混匀后再上样，其中菌液推荐上样量为2-4 μL（0.5-0.8 OD600）。
3)***PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.4 μM。
不同模板的推荐使用量：
表2 不同模板的推荐使用量
|
模板种类 |
使用量范围（25 μL反应体系） |
|
基因组DNA |
10–1,000 ng |
|
质粒或λDNA |
0.5-50 ng |
|
大肠杆菌菌液 |
0.5-0.8 OD600 |
2.PCR反应程序
表3 PCR反应程序
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
95℃ |
3 min |
1 |
|
变性 |
95℃ |
15 sec |
30-35 |
|
退火* |
60℃ |
20 sec |
|
|
延伸** |
72℃ |
1-10 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1)*推荐退火温度：60°C，也可根据自身需要设立温度梯度摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间过长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
2)**延伸速度：3 kb以内的基因组、大肠杆菌等复杂模板可设置1 sec/kb，6 kb以内复杂模板可设置3 sec/kb，10 kb以内大部分复杂模板可设置5 sec/kb扩增，10 kb以上复杂模板片段可设置10 sec/kb。6 kb以内的质粒等简单模板可设置1 sec/kb，6-10 kb质粒等简单模板可设置3 sec/kb，10 kb以上质粒等简单模板可设置5-10 sec/kb。如需提高产量可适当延长延伸时间，不宜超过30 sec/kb。
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文献和实验同时，Mix中含有dNTPs、Mg2+，使用时只需加入引物和模板即可进行扩增。此外，Mix中含有红色示踪染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。
μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
【资源】一种被广泛用于实时定量 PCR 的绿色荧光 DNA 染料
hotstart DNA 聚合酶。因此，与其他商业化的master mix 产品相比，Fast-Plus EvaGreen® qPCR Master Mix 可以为客户带来更为精确的实验结果。? EvaGreen®Dye:EvaGreen®是Biotium公司的DNA结合染料，它是一种同时适用于实时 PCR 和 高分辨率熔解曲线（HRM）分析的新一代染料。这种染料通过一种被称为“按要求释放”的全新机制，选择性的结合双链DNA。这一机制保证了较低的 PCR 抑制作用，同时也允许在染料饱和浓度以下进行高分辨率熔解
1 0.1-0.5µM Primer 2 0.1-0.5µM 10X Reaction buffer 1X Magnesium 1.0-3.0mM dNTP mix 200 mM each dNTP Thermostable DNA polymerase 1-4 units/100 ml reactionRT-PCR基础 RT-PCR将以RNA为模板的cDNA合成同PCR结合在一起，提供了一种分析基因表达的快速灵敏的方法。RT-PCR用于对表达信息进行
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