Elabscience®E-EL-M0037 小鼠白介素1β

用途
该试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中IL-1β浓度。
基本性能
性能
灵敏度 4.69 pg/mL
检测范围 7.81-500 pg/mL
特异性 可检测样本中的小鼠IL-1β，且与其它类似物无明显交叉反应
重复性 板内，板间变异系数均<10%
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠IL-1β抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的小鼠IL-1β会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗小鼠IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠IL-1β抗体与结合在包被抗体上的小鼠IL-1β结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，IL-1β浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1β的浓度。-2
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试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8°C保存12个月。试剂盒组分开封后请按照下表中的条件分别保存。
说明：浓缩HRP酶结合物(100×)和底物溶液(TMB)请避光保存。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
试验所需自备物品
1. 酶标仪(450 nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 
200-1000μL
3. 37°C恒温箱
4. 双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
6. 加样槽
样品收集方法
1. 血清：全血样品于室温放置1小时或2-8°C过夜后于2-8°C，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8°C，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，
比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声
破碎。最后将匀浆液于2-8°C，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8°C，1500×g离心10分钟，取上清检测。
5. 细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8°C，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。样本处理相关试剂推荐：PMSF蛋白酶抑制剂 (货号：E-EL-SR002)、0.25%胰蛋白酶溶液 (货号：E-EL-SR001)