伊莱瑞特 E-EL-M0044 小鼠白介素6(IL-6)酶

用途
该试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中IL-6浓度。
基本性能
性能
灵敏度 18.75 pg/mL
检测范围 31.25-2000 pg/mL
特异性 可检测样本中的小鼠IL-6，且与其它类似物无明显交叉反应
重复性 板内，板间变异系数均<10%
检测原理
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠IL-6抗体包被于酶标板上，实验时样品（或标准品）中的小鼠IL-6会与包被抗体结合。后依次加入生物素化的抗小鼠IL-6抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素，抗小鼠IL-6抗体与结合在包被抗体上的小鼠IL-6结合，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450 nm波长处测OD值，IL-6 浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-6的浓度。

试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8°C保存12个月。试剂盒组分开封后请按照下表中的条件分别保存。
说明：浓缩HRP酶结合物(100×)和底物溶液(TMB)请避光保存。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出。
2-8°C, 可存放至有效期(12个月)
试验所需自备物品
1. 酶标仪(450 nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37°C恒温箱
4. 双蒸水或去离子水
5. 吸水纸
6. 加样槽
样品收集方法
1. 血清：全血样品于室温放置1小时或2-8°C过夜后于2-8°C，1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于2-8°C，1000×g离心15分钟，取上清即可检测。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1 g的组织样品对应9 mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8°C，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
4. 细胞提取液：贴壁细胞用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8°C，1500×g离心10分钟，取上清检测。
5. 细胞培养上清或其他生物体液：收集液体后于2-8°C，1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。样本处理相关试剂推荐：PMSF蛋白酶抑制剂 (货号：E-EL-SR002)、0.25%胰蛋白酶溶液 (货号：E-EL-SR001)。-4
注意事项
 试剂盒注意事项
1) 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
2) 试验中请穿着实验服并戴乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。
3) 刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按照上述表格中保存条件存放。
4) 请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。未用完的浓缩生物素化抗体(100×)、浓缩HRP酶结合物(100×)、酶标板及其他原液按照上述表格中保存条件存放。
5) 检测使用的酶标仪需要安装能检测450±2 nm波长的滤光片，光密度范围在0-3.5之间。建议使用时提前15分钟预热。
6) 请勿使用其他批号或其他来源的试剂混合或替代本试剂盒中的试剂。
7) 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用。
8) 请勿使用过期的试剂。
 样品注意事项
1) 收集血液的试管应为一次性无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品。
2) 样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8°C，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20°C(1个月内检测)，或-80°C(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。
3) 试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。
4) 若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。
5) 若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
6) 某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。