Q5® 定点突变试剂盒（不含感受态细胞） | NEB

品牌	货号	产品中文名称	产品英文名称
NEB	E0552	Q5®定点突变试剂盒（不含感受态细胞）	Q5®Site-Directed Mutagenesis Kit (Without Competent Cells)

货号	产品中文名称	产品英文名称	规格
E0552S	Q5® 定点突变试剂盒（不含感受态细胞）	Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit (Without Competent Cells)	10 reactions

产品特点

Q5^® 定点突变试剂盒（不含感受态细胞）可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变。

• 采用非重叠的引物设计，确保高效的指数扩增，高效地为多种模板引入期望的突变
• 分子内连接后转化到 NEB 高效级感受态细胞，可得到较多菌落
• Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶错配率极低，可缩短筛选时间
• 使用热启动聚合酶，可在室温建立反应体系
• 使用 DpnI 降低背景，模板起始浓度范围更广
• 可使用常规引物，无需为引物磷酸化或纯化支付额外费用
• 易于使用的 PCR 预混液和独特的多酶 KLD 混合液，质量更高，使用更加方便
• 在室温条件下，五分钟内即可快速直接地完成处理步骤
• 可使用任意适用于克隆的 E. coli 化学感受态细胞
• 使用 NEBaseChanger 生成引物序列和退火温度

Q5 定点突变试剂盒（不含感受态细胞）可以在 2 小时内快速对双链质粒 DNA 进行定点突变（图 1）。该试剂盒使用稳定的 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶，结合客户自行设计的引物，在各种质粒中引入插入、缺失和替换突变。PCR 后将扩增材料直接添加到独特的激酶-连接酶-DpnI（KLD）酶混合液中，进行快速室温环化和模板去除（5 分钟）（图 2）。 将质粒转化到高效级 E. coli 感受态细胞（不随试剂盒提供），以确保转化长度至少为 20 kb 的质粒能获得稳定的结果。也提供含感受态细胞的试剂盒（NEB #E0554）

图 1：2 小时内完成定点突变。
使用预混液、独特的多酶 KLD 酶混合液和快速聚合酶可确保大多数质粒的突变反应在两小时内完成。
图 2：Q5 定点突变概览。
此试剂盒经优化设计，可快速有效地将插入、缺失和替换引入双链质粒 DNA。第一步是使用常规引物和 Q5 热启动超保真 DNA 聚合酶的预混液进行指数扩增。第二步是使用含有激酶、连接酶和 DpnI 的独特酶混合液一起温育。在这些酶的共同作用下，可实现 PCR 产物快速环化，并去除模板 DNA。最后一步是转化到高效级化学感受态细胞（不随试剂盒提供）。
图 3：Q5 定点突变试剂盒引物设计
使用专门设计的正向（黑色）和反向（红色）引物，将替换、缺失和插入引入质粒 DNA。与依赖线性扩增的试剂盒不同，为 Q5 定点突变试剂盒设计的引物不会重叠，从而可以确保实现指数扩增的优势。A）通过在正向引物的中间引入所需更换的核苷酸（* 表示）来产生替换，在突变的 3´ 侧应包含至少 10 个互补核苷酸序列。设计的反向引物应让两条引物的 5´ 末端背靠背退火。B）通过对删除区域两侧设计标准的、非突变正向和反向引物，来进行缺失改造。C）将少于或等于 6 个核苷酸的插入引入正向引物的 5´ 末端，同时反向引物与正向引物的互补区域的 5´ 末端背靠背退火。D）可以通过将所需插入序列的一半引入两条引物的 5´ 末端以实现更大片段的插入。插入片段的大小上限很大程度上取决于寡核苷酸合成的限制。
备注：以上仅为 E0552 的部分产品信息，如需NEB货号 E0552 的完整产品信息及相关的实验操作手册等等，请通过NEB官网查找对应的货号获取。