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- 200515
- 2026年01月05日
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QuikChange Lightning 定点突变试剂盒 (Cat. 200515)
最初的QuikChange定点突变试剂盒省去了亚克隆到M13基于噬菌体载体和用于单链DNA的救援。这使得位点定向诱变研究简单和可靠的，因为它允许寡核苷酸介导将位点特异性突变引入几乎任何双链质粒DNA。XL版试剂盒是专门为大型高效突变（4-14 KB）或以其他方式难以诱变的质粒模板和功能专为更高效的DNA复制和细菌转化设计的部件。QuikChange多系统通过使用针对不同位点的寡核苷酸允许单轮诱变多个站点（最多5个）。
- 1个位点的突变效率大于80%；同时突变3个位点的效率大于 55%
- 高效的和准确的线性扩增最小化不希望出现的错误
- 免费使用 Primer Design Program 设计工具
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文献和实验，能够有效避免延伸过程中不需要的错配。试剂盒采用的是低次数的循环延伸而非PCR，有助于减少无意错配。只需要一次酶切和转化，实验可以在一天完成。这个试剂盒适用于质粒大小不超过8Kb的质粒。后来推出的QuikChange XL site-directed mutagenesis kit则是针对大于8Kb的质粒的定点突变的，通过优化试剂特别是其感受态细胞（XL10-Gold），使得较大的质粒的定点突变也一样简单。QuikChange由于操作简单快速，效率高（ >80%）而受到普遍欢迎，光是今年的前9个月
有时候也得靠运气啦。实在不行的话再来做定点突变。对于第二种情况：这种情况下一般也就只能做定点突变了。接下来开始聊一聊定点突变的原理吧。那个Stratagene试剂盒！上面有一个说明书，说得好像很正规，不过上面好多都是什么专利啊什么注意之类的话，看都不看，我们简明扼要地只讲实验方面，通过设计引物，并利用PCR将模板扩增出来，然后去掉模板，剩下来的就是我们的PCR产物，在PCR产物上就已经把这个点变过来了，然后再转化，筛选阳性克隆，再测序确定就行了。大家马上就会想到几个问题了：第一：引物怎么设计呢？第二
我们可以继续讨论。 另外，如果大家既没有DpnI酶也没有好的PCR酶和BUFFER的话，那也有其它办法进行定点突变，只是麻烦一点，如果大家有需要的话，我会把方法贴上来。 对于多点突变技术及较长片段的缺失插入技术，同样的，如果大家有需要的话，我会把方法贴上来。 不过，如果你有钱的话，那就去买那个试剂盒吧，其中QuikChange® Site-Directed Mutagenesis Kit标准点突变试剂盒 、QuikChange® XL Site-Directed
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