- ￥2990
- 丰度蛋白
- 江苏苏州
- FK4662
- 2026年03月04日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
12个月
- 英文名：
T4 DNA Ligase and Impurity Determination Kit (3-Kit Set)
- 供应商：
苏州丰度蛋白
- 规格：
50T
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文献和实验来源的模板DNA 。 二、设备：移液器及吸头，硅烷化的PCR 小管，DNA 扩增仪(PE公司)，琼脂糖凝胶电泳所需设备(电泳槽及电泳仪)，台式高速离心机。 三、试剂： 1、10×PCR 反应缓冲液：500mmol/L KCl, 100mmol/L Tris·Cl, 在25℃下, pH9.0, 1.0％ Triton X-100。 2、MgCl2 ：25mmol/L。 3、4种dNTP混合物:每种2.5mmol/L。 4、Taq DNA 聚合酶5U/μl。 5、T4 DNA 连接酶
回收效率。 4双酶切，通常克隆转化失败就是酶切不成功。 酶切的关键也是使用好酶，建议用thermo的快酶节省时间，一般来讲质粒切10min，PCR片段纯化之后，只能够使用质粒最大处理量的一半，切30min，而如果没有经过纯化，只能够使用四分之一的处理量。其他没有需要注意的，酶切之后进行硅胶柱回收即可。 但是如果希望知道酶切的效果，建议使用自连接。即构建10ul的转化体系。其中加入8.5ul的PCR酶切片段，1ul的10x T4连接酶buffer 0.5ul的T4连接酶，于20度放置40
(1*x)/m (A*y)/n ③体系体积：通常用10-20ul。体系中尽量少含有EDTA，因为会抑制酶活。对于新手，为了提高连接成功率，在满足DNA配比的前提下尽量多地提高两种DNA总量，甚至整个体系都由DNA补齐。 ④T4连接酶：酶这东西自然是越贵越好，一分钱一分货，而且连接酶控制着整个分子克隆过程的瓶颈——连接，强烈建议买好的。我用过Promega的，还好；BBI的凑合用。如果连长片段就加二倍的连接酶。 ⑤连接时间：按说明书。普通连接酶
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