T4 DNA 连接酶 ，9015-85-4，生物活性,重组,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,1000 U/μl，阿拉丁产品图

T4 DNA 连接酶 ，9015-85-4，生物活性,重组,

ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,1000 U/μl，阿拉丁
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  • ¥79.90 - 299.90
  • 阿拉丁已认证
  • 上海
  • T665705
  • 2026年09月28日
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    • 详细信息
    • 文献和实验
    • 技术资料
    • CAS号：

      9015-85-4

    • 保存条件：

      -20°C储存,避免反复冻融；超低温运输

    • 英文名：

      T4 DNA Ligase

    • 库存：

      现货

    • 供应商：

      上海阿拉丁生化科技股份有限公司

    • 规格：

      T665705-40KU/T665705-5×40KU

    规格：T665705-40KU产品价格：¥79.90
    规格：T665705-5×40KU产品价格：¥299.90

    基本描述

    产品名称：T4 DNA 连接酶

    规格或纯度：生物活性,重组,ActiBioPure™,高性能,EnzymoPure™,1000 U/μl

    应用：DNA连接

    产品介绍：

    阿拉丁生产的 T4 DNA 连接酶可以催化粘端或平端双链 DNA 或 RNA 的 5'-P 末端和 3'-OH 末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需 ATP 作为辅助因子。同时 T4 DNA 连接酶可以修补双链 DNA、双链 RNA 或 DNA/RNA 杂合物上的单链缺刻（single-strand nicks）。
    来源（Source）大肠杆菌重组表达
    外观（Appearance）无菌液体
    保存液（Storage Buffer）20 mM Tris, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, pH 7.5.
    酶浓度（Enzyme Concentration）1000 U/μl
    纯度（Purity）不含 DNA 内切酶、外切酶和磷酸酯酶，不含 RNA 酶，满足常规连接反应要求。
    活性定义（Activity Definition）One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini concentration of 0.12 μM (300 μg/ml). 200U 等于 1 个 Weiss unit，以 Weiss unit 计，本产品共 200 单位。
    组分表
    T665705
    		Component40KU
    		5×40KUStorage
    T665705AT4 DNA Ligase (1000U/μl)
    		40µl5×40µl-20℃. Avoid freeze/ Thaw cycle.
    T665705B10× Ligation Buffer300µl
    		5×300µl-20℃. Avoid freeze/ Thaw cycle.
    产品应用 
    T4 DNA Ligase 常用于 DNA 片段和载体、linker 或 adaptor 等的连接。也可以用于缺刻修复及 Ligase 介导的 RNA 检测。
    产品优势 
    修复及 Ligase 介导的 RNA 检测。
    使用说明
    1. PCR 产物或酶切片段和普通载体的连接： 
    a. 取 1-2μg 载体酶切过夜，或至少酶切 3-5 小时以上。尽量确保酶切充分，否则后续会导致产生很多自连的克隆。 
    b. 载体酶切完毕后，可以使用试剂盒进行纯化，例如 PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化载体。对于酶切产生较大片段(大于 50-60bp)的情况推荐采用切胶回收的方式。 
    c. 对于 PCR 产物：PCR 产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的 DNA 片段。凝胶中 DNA 片段的回收可以使用试剂盒进行操作，也可以采用反复冻融等方法回收 DNA 片段。 
    d. 对于回收的 PCR 产物或其它需酶切的质粒或 DNA 片段，用适当内切酶酶切，随后纯化酶切产物。 
    注：这一步的酶切不必酶切特别充分，通常酶切效率能达到 80-90%以上即可。即本步骤的酶切通常酶切 1-2 小时即可。酶切产物可以使用试剂盒进行纯化，例如,PCR 纯化试剂盒/DNA 纯化试剂盒。也可以采用常规的酚氯仿抽提乙醇沉淀方法纯化。 
    e. 取约 25-100ng 经过酶切和纯化的载体，加入 3 倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。
    注 1：很多时候由于载体量和待插入片段的量都比较少，在回收后很难定量。此时可根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常以 DNA 分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量您的目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和待插入片段量的比例关系。 
    注 2：通常每个反应使用 0.2-0.5μl 连接酶已经足够，如果希望进一步提高连接效率，可以把连接酶的用量提高至 1μl。
    载体约 50–100 ng
    待插入片段约载体摩尔数的 3 倍
    10× Ligation Buffer2 μl
    双蒸水或 Milli-Q 水加至 20 μl
    T4 DNA Ligase0.2–0.5 μl
    总体系20 μl
    f. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。 
    g.20-25℃孵育连接 1-2 小时，或 16℃孵育连接过夜。
    注 1：对于双平端连接必须连接过夜。对于双平端连接，直接使用 T4 DNA Ligase 连接效率较低，推荐使用快速 DNA 连接试剂盒。
    注 2：为快速获得预期克隆可以参考如下方法：对于 20μl 的粘端连接反应，在连接 1-2 小时后可以取 10μl 直接转化大肠杆菌，其余 10μl 可以 16℃孵育连接过夜。如果第二天顺利获得克隆，即可进入下一步实验；如果第二天转化的大肠杆菌未获得预期的克隆，则可以取连接过夜的剩余连接产物再次转化大肠杆菌。 
    h. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。 
    2. PCR 产物和 T 载体的连接： 
    a. PCR 产物凝胶电泳后，切胶回收预期大小的 DNA 片段。凝胶中 DNA 片段的回收可以使用试剂盒进行操作，也可以采用反复冻融等方法回收 DNA 片段。 
    b. 按照 T 载体的说明书取适量 T 载体，加入 3 倍摩尔数的待插入片段。参考下表设置连接反应体系。 
    注 1：很多时候由于载体量和 PCR 产物的量都比较少，在回收后很难定量。此时可以根据回收前电泳条带的亮度进行大致的估计。通常 以 DNA 分子量标准的某一条带为参考，估计或通过灰度半定量您的目的条带和该参考条带的亮度的比例关系。然后再按照预计的纯化或凝胶回收时的得率计算出最终得到的载体量和 PCR 产物的量的比例关系。 
    注 2：通常每个反应使用 0.2-0.5μl 连接酶已经足够，如果希望进一步提高连接效率，可以把连接酶的用量提高至 1μl。
    T 载体适量
    待插入片段约载体摩尔数的 3 倍
    10× Ligation Buffer2 μl
    双蒸水或 Milli-Q 水加至 20 μl
    T4 DNA Ligase0.2–0.5 μl
    总体系约 20 μl
    c. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。 
    d.20-25℃孵育连接 1-2 小时，或 16℃孵育连接过夜。 注：为快速获得预期克隆可以参考如下方法：对于 20μl 的粘端连接反应，在连接 1-2 小时后可以取 10μl 直接转化大肠杆菌，其余 10μl 可以 16℃孵育连接过夜。如果第二天顺利获得克隆，即可进入下一步实验；如果第二天转化的大肠杆菌未获得预期的克隆，则可以取连接过夜的剩余连接产物再次转化大肠杆菌。 
    e. 随后即可直接取连接产物用于转化感受态细菌。 
    3. Linker 或 RNAi 片段和载体的连接： 
    a. 载体的酶切和纯化同步骤 1a 和 1b。 
    b. Linker 或 RNAi 片段的退火可以选择适当的 DNA 退火缓冲液，例如 Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)， 进行退火反应。
    c. 长度大于 8bp 的 Linker 或退火的 RNAi 片段，可以按照 5:1 至 10:1 的比例和载体进行连接反应。例如载体为 0.03pmol，则插入片 段可以为 0.15 至 0.3pmol。长度小于 8bp 的 linker，比例需调整为 10:1 以上。 
    d. 除插入片段的用量外，随后按照步骤 1e-1h 进行。 
    4. DNA 自身环化的连接： 
    参考步骤 1e，待插入片段换成适量的水即可。其余步骤按照步骤 1f-1h 进行。 
    5. 其它类型的 DNA 片段连接参考上述方法进行。
    常见问题 
    1. 连接反应后转化效率很低或阳性克隆非常少： 
    a.可能感受态细菌转化效率太低，用质粒作为阳性对照同时检测感受态的转化效率。 
    b. 可以尝试提高载体或插入片段的纯度。对于平端连接需注意适当延长连接时间。 
    c. 可能载体酶切不够充分，用未经连接的载体转化作为阴性对照。 
    d. 用存放 DNA 的溶液进行转化，作为阴性对照，检测感受态细菌是否存在问题。
    注意事项： 
    （1）对于普通的转化大肠杆菌的操作，不必对连接产物进行纯化，连接产物可以直接用于转化。但用电转方法转化大肠杆菌时，通常宜先用 DNA 纯化试剂盒或酚氯仿抽提方法等纯化 DNA，然后再进行电转。 
    （2）需进行平端连接或快速连接时，推荐使用快速 DNA 连接试剂盒。T4 DNA Ligase 可以进行平端连接，但效率较低。 
    （3）普通连接反应不必进行凝胶电泳观察。如果需要对于连接产物进行凝胶电泳观察，推荐先在 65℃孵育 10 分钟使。 
    （4）T4 DNA Ligase 失活，以避免 T4 DNA Ligase 和 DNA 结合导致的条带位置迁移(band shift)。 
    （5）本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 
    （6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

    生物活性：1000 U/μl

    Accession #：

    级别：生物活性, 重组, ActiBioPure™, 高性能, EnzymoPure™


    产品规格参数

    储存缓冲液：20 mM Tris, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% (v/v) Glycerol, pH 7.5.

    浓度：1000 U/μl

    储存条件：-20°C储存,避免反复冻融

    运输条件：超低温运输

    稳定性与储存：长期储存-20℃（24个月）；收货后建议分装，避免反复冻融。

    CAS编号和信息：9015-85-4

    酶学委员会编号：EC 6.5.1.1

    单位定义：One unit is defined as the amount of enzyme required to give 50% ligation of HindIII fragments of lambda DNA in 30 min at 16℃ in 20 μl of the assay mixture containing 50 mM Tris, pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 μg/ml BSA and a 5'-DNA termini


    功能和特点

    Accession #：

    生物活性：1000 U/μl

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    • 【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答

      核苷酸激酶缓冲液中进行。 质量保证： 无核酸内、外切酶污染。每批T4 DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。 单位定义(粘性末端活性单位）：在20µl连接反应体系、0.12µM (300µg/ml)的5'-末端浓度条件下，16°C反应30分钟，能使50% 的经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个NEB单位。 一个粘端连接活性单位=0.015个韦氏（ATP-PP交换）单位

    • DNA连接酶概述

      相关专题 重组DNA技术工具酶 连接酶旧称“合成酶”。DNA连接 酶是1967年在三个实验室同时发现的，最初是在大肠杆菌细胞中发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 DNA连接 酶

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