T4 DNA Ligase，阿拉丁

T4 DNA Ligase 是从表达T4 DNA Ligase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化而来的，催化相邻DNA链的5’磷酸基团和3’羟基基团以磷酸二酯键结合反应。该酶可催化平末端或粘性末端DNA的连接，修复双链DNA、RNA、DNA/RNA杂交中的单链中的单链切口，但是对于单链核苷酸，没有活性。

实验前准备及重要注意事项：
1.T4 DNA Ligase的最终用量不要超过推荐的用量，否则影响连接效率。
2，PEG可以极大提高平末端的连接效率，我们推荐加入终浓度为5% PEG Solution以提
高平末端的连接效率。
3，为了提高转化效率，建议所加入连接产物的量不要超过感受态细胞体积的10%
4.由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比较粘稠容易挂壁，建议使用之前短暂离心将液体
收集到管底，取样时枪头尽量不要深入液面太深以免粘在枪头上造成损失
使用方法：
i粘性末端的连接
1.反应体系:

2.涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3.反应条件:22C孵育10分钟。
4.瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65C孵育10分钟或70C孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase
5.可取5pL连接产物热击转化5uL感受态细胞或取15pL连接产物电击转化50pL感受态细胞。
注意:如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DMA Ligase后进行电击转化

ii 平末端的连接

1.反应体系：

2.涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3，反应条件:22C孵育1小时。
4.瞬间离心，将管壁上的溶波收集到管底，65C孵育10分钟或70C孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase
5.可取5L连接产物热击转化50pL感受态细胞或取1-2L连接产物电击转化50pL感受态细胞。
注意:如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化
iii 线性DNA的自身环化
1.反应体系:

2.涡旋震荡，瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底。
3，反应条件:粘性末端22C孵育10分钟:平末端22C孵育1小时。
4.瞬间离心，将管壁上的溶液收集到管底，65C孵育10分钟或70C孵育5分钟以灭活T4 DNA Ligase
5.可取5pL连接产物热击转化5pL感受态细胞或取1-2pL连接产物电击转化50pL感受态细胞。
注意:如需电击转化，推荐用乙醇沉淀法去除T4 DNA Ligase后进行电击转化