- ￥312
- 西格
- XG-P3034
- 国产
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
25
- 保质期：
2 年
- 供应商：
上海西格
- 保存条件：
-20°C
- 规格：
35KU
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3034 | T4 DNA 连接酶 | 35KU |
描述：T4 DNA Ligase 可催化相邻 DNA 链的 5’-P 末端和 3’-OH 末端以磷酸二酯键结合的反应，需 ATP 作辅酶，不仅 可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的 DNA 的连接，也 可以催化 DNA 与 RNA 之间以及少数 RNA 之间的连接。可 应用于在粘性末端或平末端连接双链 DNA 分子，也可应用 于修补双链 DNA、RNA 或 DNA RNA 杂交体上的缺口。
组分
储存：-20°C 可保存 2 年。
活性定义：16°C 反应 30 分钟条件下，使 1pmol 的粘性末端
DNA 连接所需要的酶量定义为 1Unit。
失活：65°C，10 分钟。
10×T4 Ligase Buffer：500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mMMgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以下组分配制反应体系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
载体 50 ng(0.2-1pmol)
插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：两个片段的连接时，通常载体与插入片段的摩尔比为1:3（但该比例并非绝对严谨，在 1:1-1：10 范围内均可获得理想的实验结果），提取根据片段大小与浓度，计算其摩尔浓度。
2. 如为粘末端连接反应， 22°C （16-37°C）连接 30min，连接产物直接用于转化（或冻存于-20°C）。
PCR反应基本步骤：
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
利用高温（93-98℃）使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟，接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling)：
在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension)：
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr（来自于嗜热菌Thermus brockianus）约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂？
一、模板DNA：PCR反应需要模板DNA，如从细胞、组织、血液中提取DNA等；
二、引物：PCR反应的两个引物，分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域，引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物；
三、dNTPs：PCR反应中需要四种dNTPs，包括脱氧腺苷酸（dATP）、脱氧胸苷酸（dCTP）、脱氧鸟苷酸（dGTP）、脱氧胞嘧啶酸（dTTP），用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程，用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增；四、Taq DNA聚合酶：PCR反应需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等，用于扩增DNA链；
五、PCR buffer溶液：对PCR反应具有缓冲作用，调节反应pH，硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛，可增强PCR反应特异性，从而提高反应效率；
六、酶切体系：PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤，常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准，用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒：用于纯化PCR反应产物；
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