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T4 DNA 连接酶
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25
2 年
上海西格
-20°C
35KU
描述:T4 DNA Ligase 可催化相邻 DNA 链的 5’-P 末端和 3’-OH 末端以磷酸二酯键结合的反应,需 ATP 作辅酶,不仅 可以催化粘性末端之间或平滑末端之间的 DNA 的连接,也 可以催化 DNA 与 RNA 之间以及少数 RNA 之间的连接。可 应用于在粘性末端或平末端连接双链 DNA 分子,也可应用 于修补双链 DNA、RNA 或 DNA RNA 杂交体上的缺口。
组分
储存:-20°C 可保存 2 年。活性定义:16°C 反应 30 分钟条件下,使 1pmol 的粘性末端DNA 连接所需要的酶量定义为 1Unit。失活:65°C,10 分钟。10×T4 Ligase Buffer:500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mMMgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.操作方法1. 按以下组分配制反应体系10×T4 Ligase Buffer 2 μl载体 50 ng(0.2-1pmol)插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μlddH2O Up to 20 μl注意:两个片段的连接时,通常载体与插入片段的摩尔比为1:3(但该比例并非绝对严谨,在 1:1-1:10 范围内均可获得理想的实验结果),提取根据片段大小与浓度,计算其摩尔浓度。2. 如为粘末端连接反应, 22°C (16-37°C)连接 30min,连接产物直接用于转化(或冻存于-20°C)。
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