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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
T4 DNA Ligase Activity and Impurity Determination Kit (3-Kit Set)
- 供应商:
苏州丰度蛋白
- 规格:
50T
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文献和实验来源的模板DNA 。 二、设备:移液器及吸头,硅烷化的PCR 小管,DNA 扩增仪(PE公司),琼脂糖凝胶电泳所需设备(电泳槽及电泳仪),台式高速离心机。 三、试剂: 1、10×PCR 反应缓冲液:500mmol/L KCl, 100mmol/L Tris·Cl, 在25℃下, pH9.0, 1.0% Triton X-100。 2、MgCl2 :25mmol/L。 3、4种dNTP混合物:每种2.5mmol/L。 4、Taq DNA 聚合酶5U/μl。 5、T4 DNA 连接
的牛血清白蛋白(BSA),它们可稳定酶活性,另外加入T4噬菌体的基因32蛋白则对扩增较长的DNA 片段有利.各种Taq DNA 聚合酶商品都有自己特定的一些缓冲液。 二、PCR 反应参数 1. 变性: 在第一轮循环前,在94℃下变性5-10min非常重要,它可使模板DNA 完全解链,然后加入Taq DNA 聚合酶(hot start),这样可减少聚合酶在低温下仍有活性从而延伸非特异性配对的引物与模板复合物所造成的错误。变性不完全,往往使PCR 失败,因为未变性完全的DNA 双链会很快复性,减少
Tris·Cl, 在25℃下, pH9.0, 1.0% Triton X-100。 2、MgCl2 :25mmol/L。 3、4种dNTP混合物:每种2.5mmol/L。 4、Taq DNA聚合酶5U/μl。 5、T4 DNA连接酶及连接缓冲液。 6、经SmaⅠ酶切和加dT的pUC质粒。 7、其它试剂:矿物油(石蜡油),1% 琼脂糖,5×TBE,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),无水乙醇和70% 乙醇。 操作步骤 一、PCR反应 1、 依次混匀下列试剂 35μl
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