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- 百欧泰
- 100% PET Particles-BSA, 60 um
- 2025年11月07日
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100
- 供应商：
百欧泰
- 规格：
10ML
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文献和实验yzzaici888 大家好，本人最近一直在做p-p38的磷酸化，但是一直都做不好。希望各位大侠帮助解决： 蛋白上样量80-100ug，半干转膜70min，5%BSA封闭70min，一抗CST（#9211） 1：500加，4℃孵育过夜，二抗1:8000加室温70min。曝光出的结果很不好，杂带很多，也分析不出那条是目的条带，且没有趋势，见下图 15001046419
（一）石蜡切片IGSS（1）切片脱蜡至水。（2）0.1%胰蛋白酶37℃消化20min或抗原修复20min（98℃），自然冷却至室温。（3）0.05mol/L（pH7.4）TBS洗3×3min.（4）l%EA（卵蛋白）15min,不洗。（5）适当稀释的特异抗体室温4h或4℃孵育20h,或37℃孵育1h.（6）0.05m01/L（pH7.4）TBS洗3×5min.（7）0.02m01/L（pH7.4）TBS（内含0.1%BSA）洗10min.（8）1%EA 15min,不洗，1:10~1:20稀释
3.最好根据厂商的protocol来操作实验，这是实验成功的保证。如Cell signaling会建议用含5%BSA 的TBST稀释phospho-p38等抗体，效果不错，而不是用常见的含5%non-fat milk的TBST。 4.抗体的稀释倍数也要适当。不同厂商也会有不同要求。 5.研究完某一蛋白的磷酸化情况后最好也要研究一下该蛋白总的表达量。如压完phospho-p38抗体后，我会把相同的membrane做strip后再压p38,然后再strip一次，再压内标actin
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