- ￥99 - 999
- Sigma
- 进口
- L0420000
- 2025年10月24日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
RT
- 保质期：
见标签
- 库存：
999
- 供应商：
鹿森生物
- 规格：
60mg
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文献和实验μL 体系 2× MasterMix 25 μL 上游 Primer （ 10 μM 1-5 μL 下游 Primer （ 10 μM ） 1-5 μL 模板 lamid DNA ～ 50 ng genomic DNA ～ 1000 ng cDNA ～ 500 ng 粗提液 ～ 2 μL 灭菌蒸馏水至 50 μL PCR 扩增实例： 一、plasmid DNA 扩增 1．提取的质粒 DNA 扩增 以pUC19 质粒为模板扩增 100，250，500
。 14B、随后将新的类器官转移至 1.5ml 离心管中，高速（约 6000g）离心 3-5s，或低速（约 300g）离心 3min。离心后，上皮碎片将沉降到底部，Matrigel 继续悬浮在培养基中，细胞团沉积在离心管底部。 15B、在显微镜下用移液器取出培养基和 Matrigel，向沉淀的细胞团内添加 200μl 新鲜的 Matrigel，混合均匀后在 24 孔板的每个培养孔中心接种 25μl 混合液。待 Matrigel 在 37℃ 培养箱中静置 10min 凝固后，加入 0.5ml 人芽尖
平板（25-50mg/ml），37℃培养16-20hr. 7、次日挑取平板上长出的菌落（选择最小的菌落），接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基，37℃培养10-15hr。 8、碱裂法提取质粒，0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选，大质粒为可能阳性克隆，进一步酶切鉴定。以PacI单酶切，0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段（约30kb），及一条小片段（约3.0或4.5kb）（同时可进行其它酶切鉴定），则基本确定为阳性克隆。 9、取1-5ul 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞（BJ5183
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