细胞膜红色荧光染色试剂盒(PKH26)

碧云天的细胞膜红色荧光染色试剂盒(PKH26)，即Cell Plasma Membrane Red Fluorescence Staining Kit with PKH26，是一种以PKH26为荧光探针，并提供了染色增强剂、能快速灵敏地对细胞膜进行红色荧光染色和标记的试剂盒。

本产品和Sigma公司的PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kits for General Cell Membrane Labeling (MINI26, MIDI26, and PKH26GL)的染色原理和使用方法基本一致。

PKH26是一种新型的可用于细胞膜、外泌体标记和示踪的荧光探针，分子式为C59H97IN2，分子量为961.32，CAS号为154214-55-8，呈现红色荧光。PKH26结构上带有较长的脂肪族碳尾(Carbon tails)，能稳定插入细胞膜、外泌体膜等的脂质区域[1-2]。PKH26荧光背景低，脂溶性高，荧光染色效果依赖于细胞与膜的类型，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及长期的体内外细胞示踪研究。PKH26具有较长的体内半衰期，超过100天，有利于长期的体内研究。因此PKH26非常适合用于示踪研究，也适合用于细胞增殖研究和其它长期实验。PKH26与其它绿色PKH探针互补，在混合细胞群里能定量分析，且不会受PKH2、PKH67或FITC标记的影响[3-5]。碧云天同时提供细胞膜绿色荧光染色试剂盒(PKH67) (C2073)。

PKH26可以稳定地与细胞膜脂质区结合并呈现明亮的红色荧光。荧光处于黄-橙色光谱区间，PKH26和细胞膜脂质结合后的激发光谱和发射光谱参考图1。其中，最大激发波长为551nm，最大发射波长为567nm。

图1.PKH26和细胞膜脂质结合后的激发光谱和发射光谱。

本试剂盒除了细胞膜荧光标记外，还可以用于细胞增殖分析以及鉴定正常或肿瘤组织中静止或缓慢分裂的干细胞或祖细胞。PKH26也被用于监测外泌体、病毒、血小板和其它纳米颗粒的摄取，干细胞分裂过程中膜的分配，细胞之间的膜转移，细胞吞噬作用，抗原递呈，粘附，通过间隙连接的信号传递，以及组织切片中的神经元迁移。由于其极其稳定的荧光，PKH26通常是体内细胞示踪研究中细胞荧光染料的优选，特别是标记的细胞研究周期超过一周的检测[6-8]。

本试剂盒提供的Assay Buffer与哺乳动物细胞等渗，且不含去垢剂。在生理pH范围内，PKH26荧光强度通常不受染料定位模式的影响，因此不影响染色效果。但为避免影响细胞活力，不宜将细胞暴露在染色稀释液中过长时间。

本试剂盒提供了Staining Enhancer，使细胞膜染色更加快速，荧光染色更加明亮，染色背景更低。

本试剂盒可以直接染色活的细胞或组织的细胞膜，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚`甲醛固定液(P0099)进行固定，使用其它固定液可能会导致荧光背景较高。本试剂盒对L929细胞的染色效果请参考图2。

图2.碧云天细胞膜红色荧光染色试剂盒(PKH26) (C2071)对L929细胞的荧光染色效果图。PKH26染色液加入后37ºC孵育5分钟，然后4ºC孵育15分钟，最后再进行Hoechst 33342染色。PHK26染色呈现非常明亮的红色荧光，而Hoechst 33342染色呈现蓝色荧光。本试剂盒不提供Hoechst 33342，如有需要，可自行选购Hoechst 33342染色液相关产品(C1022/C1025-C1029)等。实际的染色效果会因为实验条件、检测仪器的不同而存在差异，本图仅供参考。

96孔板每孔检测体系的总体积为100μl时，或每个流式细胞检测的细胞数为100万时，本试剂盒小包装、中包装和大包装分别可以进行50次、250次和1000次检测。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
C2071S-1	PKH26 (250X)	20μl
C2071S-2	Staining Enhancer (400X)	20μl
C2071S-3	Assay Buffer	5ml
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
C2071M-1	PKH26 (250X)	100μl
C2071M-2	Staining Enhancer (400X)	100μl
C2071M-3	Assay Buffer	25ml
—	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
C2071L-1	PKH26 (250X)	400μl
C2071L-2	Staining Enhancer (400X)	400μl
C2071L-3	Assay Buffer	100ml
—	说明书	1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。PKH26 (250X)须避光保存。Staining Enhancer (400X)和Assay Buffer也可4ºC保存，至少3个月有效。

注意事项：

PKH26 (250X)易⽔解并且其溶剂易挥发，第一次使用时请分装成小包装后-20ºC保存，以避免反复冻融并减少挥发。PKH26 (250X)每次取用时，请注意尽量减少开盖的时间，尽量即开即用，用后立即盖紧盖子。如果因为未及时盖紧盖子导致液体的挥发，后续使用时可以先测量体积，并按照实际的有效浓度进行使用。

PKH26 (250X)在-20ºC、4ºC等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可在室温或37ºC水浴片刻至全部融解后，使用BeyoFuge™掌上离心机(5000rpm) (E6686)快速离心3-5秒，使附着在管盖或管壁上的PKH26 (250X)聚集于管底。

含血清、BSA或BSA类似物的溶液对本PKH26的标记有干扰，须避免。

PKH26染色时，体系中不能含有叠氮化物或严重抑制细胞正常代谢的毒性物质。

PKH26 (250X)不宜直接加入到细胞培养液中进行染色，否则将导致异质染色并降低细胞活力。

荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板，推荐使用碧云天BeyoGold™全黑96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP966)或BeyoGold™黑色透明底96孔细胞培养板(平底带盖, 独立包装) (FCP965)。

Assay Buffer经过滤除菌处理，在使用时须注意避免微生物污染，否则很可能严重影响染色效果。如果Assay Buffer发生浑浊等明显的微生物污染，就不能继续使用。

本试剂盒可以对贴壁细胞进行标记，但使用单细胞悬浮液可以获得更均匀的染色。可以将贴壁细胞先消化并收集细胞，重悬后分散制备成单细胞悬液，可获得更佳的染色效果。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

如果染色时间过长或染色后细胞继续培养，探针也可能进入细胞内而染色其它细胞器的膜。

PKH26 (250X)有易燃性，操作时请小心，并注意有效防护，同时必须远离热源、花火、明火、热表面等可能引起燃烧的环境；对人体有害或有刺激性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。