GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针)

碧云天GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针)，即Glutathione-Tracker Near-infrared，也称谷胱甘肽荧光探针或GSH荧光探针，是一种新型的高特异性、高灵敏度、高生物安全性检测GSH并产生强烈的近红外荧光信号的探针。本产品由河南中医药大学苑娟教授团队研发[1]，目前授权碧云天进行独家销售。

谷胱甘肽(Glutathione)是一种由3个氨基酸残基组成的小肽，全称为谷氨酰-半胱氨酰-甘氨酸，英文名称为Glutamyl-cysteinyl-glycine，简称为Glutathione。由于半胱氨酸上的巯基(SH)为谷胱甘肽的活性基团，所以常简写为G-SH或GSH。谷胱甘肽包括还原型谷胱甘肽(Reduced glutathione, 常称为GSH)和氧化型谷胱甘肽(Oxidized glutathione disulfide)两种形式。由于氧化型谷胱甘肽是由两个GSH通过巯基脱氢而成，所以常简写为G-S-S-G或G·SSG。还原型谷胱甘肽是绝大多数活细胞中巯基的主要来源，对于维持蛋白质中巯基适当的氧化还原状态有重要作用，并且是动物细胞中关键的抗氧化剂[2]。谷胱甘肽可以调控细胞内的氧化还原稳态外，还能激活多种酶，从而调控糖类、脂肪及蛋白质代谢等，是一种细胞内重要的调节代谢的物质。其异常浓度水平与许多疾病有关，包括生长缓慢、肝脏损伤、癌症、艾滋病、神经退行性疾病等[3]。因此，监测细胞、组织、生物体内GSH水平对生物学研究和临床诊断具有重要意义。

GSH-Tracker NIR，又称NRh‑BZ、NRh-GSH，分子式为C₄₈H₄₆BrN₄O₂，分子量为752.27，化学结构式参考图1。GSH-Tracker NIR，属于off‑on型荧光探针[4]，是基于取代反应和水解反应诱导的螺内酰胺环开环来实现对GSH的识别。游离GSH-Tracker NIR因螺内酰胺环闭环而不呈现荧光，识别到GSH后，可诱导探针分子的螺内酰胺环开环，产生强荧光，从而实现复杂生物样品中GSH含量的快速检测。最大激发波长为670nm，最大发射波长为746nm。

图1. 碧云天GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针) (S1087)的化学结构式。

本产品灵敏度高、工作剂量低。经测试，10μM的本产品可在5秒内对GSH迅速响应，且荧光强度迅速增强，在20秒左右荧光强度达到最大(10.5倍)并保持稳定；本产品最大发射波长处的荧光强度与GSH浓度在0-4μM范围内呈良好的线性关系(图2)；本产品与活细胞共同孵育30分钟，与大鼠肝组织切片孵育1小时，可显示出很强的荧光信号并检测到相应的荧光成像。

图2. 碧云天GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针) (S1087)检测GSH标准曲线。经计算检测限低至46.8nM。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品生物安全性高。经测试，使用10µM的本产品与MCF-7细胞孵育约30分钟，细胞活力未见明显影响；使用20µM浓度的本产品与MCF-7细胞孵育24小时后，细胞存活率高达96%。本产品用于MCF-7活细胞的染色效果参考图3。

图3. 碧云天GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针) (S1087)对MCF-7细胞的染色效果图。使用10μM的本产品与MCF-7活细胞共同孵育30分钟，可检测到相应的荧光成像。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品可应用于溶液、活细胞和组织成像，组织穿透能力强，具有更低的本底荧光。经典的荧光探针激发和发射的波长主要位于可见光范围，可见光源激发容易导致光漂白与光致毒等问题，生物组织的吸收、散射以及自发荧光干扰导致背景信号高、组织穿透力差，限制了其在生物成像领域的应用。本产品的发射峰在746nm左右，位于近红外(Near-infrared, NIR)一区(650-900nm)，具有较强的组织穿透力、较低的背景荧光和生物损伤。组织荧光成像实验表明，本产品可以用于大鼠肝组织切片0-150μm的不同深度处的激光共聚焦扫描成像，穿透深度高达150μm (图4)。

图4. 碧云天GSH-Tracker NIR (谷胱甘肽近红外荧光探针) (S1087)对大鼠肝组织的染色效果图。10μM的本产品与大鼠肝组织孵育1小时，组织切片显示出强的荧光信号。本图像由Zeiss LSM 880激光共聚焦扫描显微镜在z扫描模式下采集。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本产品稳定性好、抗干扰能力强。在生理pH条件下，本产品对GSH识别保持稳定，可以实现对GSH的高选择性响应，同时本产品具有良好的抗干扰能力，检测过程中不易受生物体系基质的干扰，探针在加入其它氨基酸(Cys、Hcy、Thr、Phe、Met、Ala、Ile、Pro、Gly、His、Ser、Val、Arg)前后，响应强度几乎不变，可用于复杂生物样品中GSH的检测。

本产品操作简单，使用方便。本产品使用时，细胞水平和组织切片只需进行简单孵育，操作非常简单。无需对细胞进行固定或裂解，可实时检测活细胞GSH含量。

本产品提供1mg和5mg粉末装及相应的DMSO溶剂。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
S1087S-1	GSH-Tracker NIR	1mg
S1087S-2	DMSO	1ml
-	说明书	1份

 

产品编号	产品名称	包装
S1087M-1	GSH-Tracker NIR	5mg
S1087M-2	DMSO	5ml
-	说明书	1份

保存条件：

4ºC保存，一年有效。-20ºC可以保存更长时间。GSH-Tracker NIR须避光保存。

注意事项：

配制成储存液后，可适当分装后-20ºC避光保存，须避免反复冻融。

须使用可用于近红外检测的荧光光谱仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜或小动物活体成像设备等用于溶液、活细胞和组织中GSH检测。

对于细胞染色，建议染色完成后立即进行观测；如果条件限制，请避光4ºC保存，并在24小时内进行检测，放置时间过久可能会导致荧光会部分淬灭。需要特别注意，保存较长时间(例如24小时)的检测效果很可能和立即检测的效果有所不同。

荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

需自备细胞培养板、盖玻片和载玻片等(可以向碧云天订购)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。