ZENOAQ STEM-CELLBANKER® 干细胞冻存液

一、产品概述
STEM-CELLBANKER ® EX GMP级（SCB EX）是一种细胞冷冻保存溶液，它扩展了细胞治疗的可能性。SCB EX是一种简单的组合物，由在静脉注射中被证实的成分组成。它是一种含DMSO的低温保存溶液，是一种不含血清和动物成分的无氙产品。SCB EX还可以保存人类造血干细胞和人类脂肪来源的间质/干细胞。它完全不含血清和动物源成分，只含有USP、EP、JP级配料或JP辅料。SCB EX在符合JP、EU、US和PIC/S GMP指南的设施中制造，生产质量和质量控制符合JP GMP指南。
※本产品已于2020年在PMDA的MF注册，并于2022年在CBER（生物评估与研究中心）/FDA（美国食品和药物管理局）的BBMF注册。
※ 本产品的组成与HSC-BANKER® GMP级相同。

二、核心优势
1.GMP等级合规性
生产流程严格遵循GMP标准，涵盖原材料筛选、洁净环境控制（A级洁净区）、工艺管理及质量检测等环节，符合国际和国内法规要求（如EMA、FDA、中国NMPA指导原则）。产品具备高度批次一致性与可追溯性，大幅降低临床应用风险。

2.卓越的冻存性能
采用非程序降温配方，无需使用程序降温仪，可直接置于-80℃冰箱或液氮中保存，简化操作的同时，确保干细胞（如间充质干细胞、多能干细胞、免疫细胞等）复苏后存活率达到90%以上，优于传统DMSO+血清冻存体系。

3.无动物源成分
配方不含胎牛血清（FBS）、动物蛋白及其他异种成分，从源头规避病毒、支原体等外源污染物的引入，降低免疫原性风险，契合细胞治疗领域“无血清化”、“无异种成分”的发展趋势。

4.保持干细胞干性与功能
经长期冻存（-196℃液氮条件下可保存5年以上），干细胞仍能保持正常形态、表面标志物表达（如CD90、CD105、CD73等）及染色体核型稳定性，同时保留良好的多向分化能力（成骨、成脂、成软骨分化）和增殖活性。

5.即用型设计
产品为无菌即用型液体，无需二次配制，直接分装即可使用，简化操作步骤，减少污染风险，适用于自动化细胞处理系统，提升实验室及生产线效率。

三、应用范围
（1）使用脂肪衍生基质/干细胞 (ADSC) 进行冷冻保存性能测试。
1. 细胞活力测试
ADSC用SCB EX 一起冷冻保存 4、12、24 和 48 周。解冻后立即评估细胞活力（左图）和解冻后过夜（右图）。用 SCB EX 冷冻保存的细胞即使在长期冷冻保存后也显示出高活力，即使在过夜休息后也保持高活力。

2. 细胞恢复测试
ADSC用SCB EX 一起冷冻保存 4、12、24 和 48 周。然后，我们评估解冻后过夜的细胞附着（细胞恢复；左图）和解冻和培养 72 小时后的细胞生长速率（倍增时间；右图）。结果表明，即使经过长期冷冻保存，细胞恢复和细胞生长速度也没有受到影响。
 
3. 细胞识别测试
ADSC用SCB EX 一起冷冻保存 4、12、24 和 48 周。然后，我们使用流式细胞仪的阳性和阴性标记评估解冻后的细胞身份。结果表明，即使在长期冷冻保存后，用每种标记物标记的细胞百分比也不受影响。
阳性标记；CD29、CD73、CD90和CD105
阴性标记；CD11b、CD19、CD34、CD45和HLA-DR
 
4. 细胞功能测试（IDO定量和T细胞增殖抑制试验）
ADSC 与 SCB EX 一起冷冻保存 4、12、24 和 48 周。然后，我们评估了解冻后ADSC的细胞功能。结果表明，即使经过长期冷冻保存，在MSCs存在下IDO表达和T细胞增殖抑制率均不受影响。
 
方案（CELLBANKER ® 系列）
冻存：
为了获得最佳结果，冷冻保存的细胞应处于对数生长阶段。可以替代类似或标准的冷冻方案。
1.检查并确保细胞培养物没有污染、处于健康状态和适当的流动性等。
2.进行细胞计数以确定细胞的存活率
3.将细胞轻轻打团离心（3-5分钟，在1，000~2，000转/分钟，4°C下）。用吸入器除去上清液。
4.用CELLBANKER冷冻保存培养基轻轻悬浮细胞（1毫升用于5×10 5 -5×10 6 细胞）。
5.将细胞悬浮液以1毫升的比例分散到已标有细胞系名称、细胞浓度、过渡日期和其他基本信息的冷冻保存瓶中。
6.将小瓶直接置于-80°C储存，如有必要，在小瓶冷冻至少24小时后，将冷冻小瓶转移至液氮储存罐。
重要提示:最佳方案可能因细胞类型而异。
 
解冻：
1.将冰冻的细胞从储存室中取出，在37°C的摇水浴中迅速解冻。
2.立即稀释并轻轻将每1毫升细胞与10毫升完全细胞培养基混合。
3.将细胞轻轻打团离心（3-5分钟，在1000~2000转/分钟，4°C下）。取出上清吸附器。
4.用适当体积的完整细胞培养基轻轻悬浮细胞，然后放入培养瓶中。
5.按照标准程序继续进行进一步的培养程序。
※如果存活率低，可以尝试使用冷冻箱等缓慢冷冻的方法。

五、储存与稳定性
储存在2至 8°C或-20°C以下。当未开封并储存在2至8°C时，产品自生产之日起可保持稳定3年。

六、质量控制标准

七、详细使用方法
（1）准备工作
1.试剂解冻：将STEM-CELLBANKER® EX GMP级冻存液从-80℃冰箱取出，2-8℃避光解冻（建议提前24小时转移至冰箱冷藏层，避免反复冻融）。解冻后轻轻混匀，观察无沉淀或结晶即可使用，未用完的试剂需在2-8℃保存，24小时内使用完毕。
2.细胞准备：收集处于对数生长期的目标细胞，经离心（根据细胞类型选择适宜转速，如1000-1500 rpm，5分钟）后弃上清，用少量完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，调整细胞浓度至1×10⁶ - 1×10⁸ cells/mL（具体浓度根据细胞类型优化）。

（2）细胞冻存操作
1.细胞与冻存液混合：在无菌环境下，将预冷的STEM-CELLBANKER® EX冻存液按1:1体积比缓慢加入细胞悬液中（例如1mL细胞悬液+1mL冻存液），边加边轻柔混匀（避免剧烈震荡损伤细胞），最终细胞浓度建议为5×10⁵ - 5×10⁷ cells/mL。
2.分装冻存管：将混合后的细胞悬液迅速分装至无菌冻存管中（每管1-2mL），旋紧管盖，做好标记（细胞名称、冻存日期、浓度等）。

（3）冷冻程序
1.梯度降温法：将装有细胞的冻存管放入程序降温盒（内含异丙醇或专用冻存液），立即置于-80℃冰箱冷冻至少24小时（降温速率约-1℃/min）。
2.长期保存：24小时后，将冻存管从-80℃冰箱取出，迅速转移至液氮罐（气相或液相）中长期保存，记录存放位置。

（4）注意事项
1.无菌操作：全程严格遵守GMP级无菌操作规范，避免试剂污染；冻存液解冻后若出现浑浊或沉淀，禁止使用。
2.细胞状态：确保冻存前细胞活力>90%，避免在细胞汇合度过高、老化或污染时冻存。
3.快速转移：从-80℃冰箱转移至液氮罐过程中，避免冻存管长时间暴露于室温，建议使用干冰容器转运。
4.安全性：操作液氮时佩戴防护手套、护目镜等防护装备，防止冻伤；冻存管使用前检查密封性，避免液氮渗入管内导致爆炸。
5.适用范围：本产品适用于间充质干细胞、造血干细胞、免疫细胞等多种哺乳动物细胞的冻存，具体细胞类型的优化浓度和程序可参考产品说明书或文献。

（5）复苏建议
复苏时，从液氮中取出冻存管，立即置于37℃水浴中快速晃动至完全融化（约1-2分钟），无菌条件下将细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀，离心（1000 rpm，5分钟）后弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种培养。
提示：具体操作请结合目标细胞特性及实验室标准流程调整，使用前务必仔细阅读产品说明书及GMP级操作指南。