ATP荧光法细胞活力检测试剂盒（升级版）

产品简介

ATP是细胞内最重要的能量分子，可以用来衡量细胞新陈代谢水平，因此可通过ATP含量反应活细胞的数目。ATP生物发光技术的原理是荧光素酶以荧光素、三磷酸腺苷（ATP）和O₂为底物，在Mg²⁺存在时，将化学能转化为光能，因此在一定范围内，ATP浓度与发光强度呈正比。基于这一原理，本试剂盒利用萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）催化底物——荧光素的转化，高效利用ATP的能量，发射出光子，发光信号可以反映ATP的量，而ATP的量可以反映细胞数目，从而达到检测目的。
本试剂盒提供的发光法细胞活力检测试剂线性范围广、灵敏度高、稳定性好：96孔板中，在5个至100000个细胞范围内，迅速完成检测，仅需10 min；无需洗涤细胞，也无需更换或去除培养液；半衰期长，具有极好的稳定性；相比于其他常见的细胞活力测定方法如Calcein-AM、CCK-8等，也更加简便快捷。

产品信息

储存条件

-25~-15℃储存，有效期1年。建议分装保存，避免反复冻融。

注意事项

1. 荧光素酶活性对温度比较敏感，所以反应前细胞和检测试剂均需平衡至室温后再进行测定。请勿室温存放。
2. 检测试剂请混匀后使用。
3. 本试剂盒的检测试剂中含有荧光素酶，反复冻融会导致其逐渐失活。为取得良好的使用效果，第一次解冻后可适当分装保存，但需注意分装的容器不能有ATP污染。
4. 待测药物的溶剂含量较高时可能会干扰荧光素酶反应，从而影响化学发光信号。可以通过设置含有溶剂的细胞培养液对照孔排除溶剂的干扰。
5. 检测时须使用适合于细胞培养的白色或黑色的96孔板或384孔板。如果使用普通透明的96孔板或 384孔板，相邻孔之间会产生相互干扰。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅用于科研。

使用说明
1. 细胞培养
使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100 μL细胞（根据培养时间确定初始接种的细胞密度，检测时每孔细胞数量不宜超5万个），同时设置不含细胞的培养液的孔作为阴性对照，37℃，5% CO2培养细胞。也可以设置细胞的浓度梯度，以得到最佳的实验结果。根据需要在合适的时间加药处理细胞。
2.（可选）ATP 标准曲线的制作
把自备的ATP标准溶液用PBS稀释成适当的浓度梯度，96孔板每孔加入100 μL的标准品。
3. 细胞活力检测
1）融解冻存的发光法检测试剂，并平衡至室温（请勿在超过25℃以上环境进行融化，避免活性减弱）
2）取出细胞培养板，室温放置10-20 min，使培养板温度平衡至室温。
3）96孔板每孔加入100 μL检测试剂（384孔板每孔25 μL ) (由于孔的边缘效应，可能会导致发光信号不稳定，不建议在边缘铺板）。
4）室温振荡2-5 min，以促进细胞的裂解。
5）不透明封板膜封板，室温避光放置10 min，使发光信号达到最大。
6）使用多功能酶标仪进行化学发光检测，检测波长560 nm。根据仪器要求设置相应的参数，每孔的检测时间一般为0.25-1 s，具体需根据仪器的检测灵敏度进行适当的调整。
7）根据化学发光读数计算细胞的相对活力，或根据ATP标准曲线计算ATP含量从而得出细胞的相对活力。
【注】检测效果因细胞的种类不同而异，对于一些ATP含量特别高的细胞，在细胞数量达到100000以上可能会出现化学发光读数继续升高，但丧失线性关系。