SuperDissol 速溶颗粒转膜液

【求助】western 转膜 mark转不上

zhangqiang6612 最近做wb时，转膜后mark很淡，几乎没有 转膜条件：300mA，恒流 45min，分子量大小40kd 丽春红染膜后，条带很淡 转膜液配方：Tris 5.8g，甘氨酸2.9g,甲醇200ml/L,补足液体(去离子水)至1000ml 请高位高手指点 蓝天飞龙 有图吗？ zhanghai123

Western 实验步骤

80 V)要低于分离胶电泳电压(建议 110-150 V)，以达到更好的浓缩效果，使样品进入分离胶时被压缩在同一水平线上。电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处停止电泳，电泳时间约 2-3 小时。 电转（湿转法） 1） 电泳结束后取出凝胶，在电泳缓冲液中（冷藏的）漂洗数秒。按“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸泡透的海绵垫，再各放一块转膜液浸透的蛋白转移垫(定性滤纸），将凝胶平放在阴极侧滤纸上，最后将转膜液浸透并事先用甲醇浸泡的 PVDF 膜平放在凝胶上，去除气泡，夹好电

WB 前传：你了解你的目的蛋白吗？

转膜缓冲液非常有帮助。如果 PI 接近转膜缓冲液的 pH 的话，蛋白质电离程度小，带的电荷就少，转印效率就会非常低。所以对这种蛋白质，你选择常规的 pH8.8 的转膜缓冲液可能就不合适，至少应该选 pH11 的 CAPS 转膜缓冲液或者用 0.7% 乙酸的酸性转膜液效果才会比较好。否则不管你转膜时间多长，蛋白质都在凝胶里一动不动，显然实验室不会出结果的。如果你用酸性转膜液的话，记得把膜放在凝胶的上面，因为此时蛋白质是往负极移动的。