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- 详细信息
- 文献和实验
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RT
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99
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鹿森生物
- 规格:
500ml
纯度:pH5.5
保存温度:RT
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文献和实验】1. 消化缓冲液:100 mM NaCl,10 mM Tris.Cl (pH8.0) 25 mM EDTA (pH8.0),0.5% (w/v) SDS,0.1 mg/mL 蛋白酶 K。2. 7.5mol/L 乙酸铵。3. 100% 乙醇。4. 酚/氯仿/异戊醇。【实验方法与步骤】1. 将新鲜组织剪成小块并立即置于液氮中冻存;2. 将 200 mg~1 g 的组织用预冷的研钵研碎,或用锤子将其捣为细粉末,每 100 mg 组织用 1.2 mL 消化缓冲液悬浮,然后于 50℃ 摇荡温育 12~18 h
加入适量红细胞裂解液裂解红细胞(可加入 500 μL 1× 红细胞裂解液重悬细胞,室温裂解 2 min 后,立马加入 10 mL PBS,300 g 离心 5 min 后弃上清)。 若提取的腹腔巨噬细胞需培养,请注意无菌操作。 收集腹水时,从小鼠左侧(肠道较多)注射 PBS,从右侧(器脏较大)抽腹腔灌洗液,注意不要扎到器脏。 小鼠腹腔灌洗液收集细胞比较脆弱,加细胞染色缓冲液有利于细胞的保存,但建议当天及时检测。 小鼠腹腔灌洗液中大多数为巨噬细胞,巨噬细胞检测需要封闭Fc受体,此时可使用小鼠 CD16/32纯
4.0。(2) 10×磷酸盐-NaCl 缓冲液(PBS):100mmol/L PBS,pH7.4。称NaCl 80g、Na2HPO412H2O 29g、KCl 2g、KH2PO4 2g,加蒸馏水溶解,加入100mmol/L EDTA 20ml,用去离子水定容至l000ml。(3) 透析液 10mmol/L Na2HPO4-KH2PO4缓冲液,含15mmol/L NaCl,pH7.2。(4) 硫酸铵。(5) 辛酸。四、操作步骤 1、抗血清用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释,用0.1mol/L NaOH调至血清
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