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北京百泰派克生物科技有限公司
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树脂包埋标本的优缺点
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树脂包埋标本的优缺点
树脂包埋标本是一种广泛应用于生物组织学和材料科学中的样品制备技术,其核心原理是通过将生物或非生物样本浸渍于液态树脂中,随后通过聚合反应固化形成稳定的固态包埋块。这种技术能够提供优异的机械支撑和结构完整性,尤其适用于需要超薄切片(如透射电子显微镜观察)或长期保存的样本。树脂包埋标本的优缺点显著,主要体现在以下几个方面:
首先,树脂包埋标本的优点在于其zhuóyuè的样本保护能力。树脂固化后形成的硬质包埋块能够有效防止样本在切片过程中发生形变或撕裂,尤其适用于脆性组织或精细结构的研究。例如,在神经科学领域,树脂包埋标本能够完整保留突触的超微结构,为突触可塑性研究提供高分辨率成像基础。此外,树脂包埋标本的化学稳定性较高,能够耐受电子显微镜观察中的高真空环境和电子束轰击,这是石蜡包埋等传统方法wúfǎbǐnǐ的。
然而,树脂包埋标本的缺点同样不容忽视。树脂渗透过程可能对样本的抗原性造成破坏,导致免疫组化染色效果不佳。尽管可以通过优化包埋前处理(如抗原修复技术)部分缓解这一问题,但某些表位仍可能因树脂的交联作用而yǒngjiǔ丧失。此外,树脂包埋标本的制备周期较长,从固定、脱水、渗透到zuì终聚合通常需要数天时间,这对需要快速获得结果的临床诊断或高通量研究构成一定限制。
从技术细节来看,树脂包埋标本的树脂选择至关重要。环氧树脂(如Epon 812)因其高硬度和低收缩率成为电子显微镜研究的shǒuxuǎn,但其操作毒性较高;而丙烯酸树脂(如LR White)则更适合免疫标记研究,但机械强度稍逊。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。此外,树脂包埋标本的切片厚度可jīngzhǔn控制至50-100纳米,但需依赖经验丰富的操作者以避免刀痕或褶皱。
在应用场景上,树脂包埋标本的优缺点决定了其更适合基础研究而非临床常规。例如,在植物细胞壁研究中,树脂包埋标本能清晰展现纤维素微纤维的排列方式,但其不适用于需要频繁重复取样的动态实验。
常见问题:
Q1. 树脂包埋标本是否会导致细胞内脂类物质的溶解或移位?
A:是的,树脂包埋标本制备过程中的有机溶剂(如bǐngtóng或乙醇)脱水步骤会溶解部分脂类物质。采用sìyǎnghuàé后固定可部分保留膜结构,但无法wánquán避免脂类流失。冷冻替代技术(cryo-substitution)是解决这一问题的替代方案。
Q2. 如何评估树脂包埋标本的聚合程度是否充分?
A:可通过硬度测试和溶解度实验判断。wánquán聚合的树脂包埋标本在二甲苯中浸泡24小时应无软化或溶解迹象。此外,傅里叶变换红外光谱(FTIR)可检测树脂中未反应的单体峰(如环氧树脂的915 cm⁻¹峰)来定量聚合效率。
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文献和实验切片电子染色所用的铅或铀与免疫染色的结果混淆,应将相邻的超薄切片分别捞在两个铜网上,一张直接进行观察,另一张电子染色后观察,对比分析。 包埋前染色法的主要优点:①因组织细胞免疫染色前未经OsO4 固定、脱水及树脂包埋等处理,故组织细胞的抗原性保存相对较好,可获得较好的免疫染色效果;②可在光镜下选取免疫反应阳性部位定位制作超薄切片,有利于提高电镜的工作效率。主要缺点是受到抗体穿透性的限制,组织深层细胞内抗原难以标记。 2.包埋后染色 包埋后染色即组织标本经OsO4 固定、脱水、树脂包埋
分钟,PB漂洗2次,每次10分钟; 4. PB配制的1%戊二醛固定30分钟~2小时,随后PB漂洗2次,每次10分钟; 5. 4℃下银加强漂洗缓冲液漂洗2次,每次10分钟; 6. 4℃下银加强10―15分钟(避光); 7. 4℃下定影液中定影10分钟后PB漂洗2次,每次10分钟; 8. PB配制1%锇酸后固定30―60分钟;PB漂洗2次,每次10分钟。 9. 按常规电镜标本制作方法进行系列乙醇或丙酮脱水、包埋、超薄切片、电子染色和电镜观察。 免疫纳米金染色法电镜
2次,每次10分钟。 9. 按常规电镜标本制作方法进行系列乙醇或丙酮脱水、包埋、超薄切片、电子染色和电镜观察。 免疫纳米金染色法电镜图 环氧树脂包埋前免疫纳米金染色示亨廷顿蛋白相关蛋白(huntingtin-associated protein 1.HAP1)在小鼠脑内神经元轴突终末内突触囊淮上的定位(A1―A3,含HAP1的轴突终末:A4,无HAP1的轴突终末;D1和D2,树突。箭示纳米金一银颗粒)
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