永生化小鼠树突状细胞 IMDC-MutuDC1940

细胞名称	永生化小鼠树突状细胞
英文名称	MutuDC1940
规格	T25/冻存管
货号	CTCC-001-0428
种属	小鼠（Mus musculus）
组织来源	脾（Spleen）
疾病	未知（Unknown）
性别	未知（Unknown）
年龄	未知（Unknown）
培养体系	该细胞系培养所用基本培养基为 RPMI1640,配置完全培养基时需加 入heat-inactivated 20%FBS(热灭 活), 20%FBS, 0.05mM 2-Mercaptoethanol 1%Anti-Anti。
细胞形态	/
生长特性	贴壁/悬浮生长（Adherent and Suspension）

拆包 & 存储

1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液

2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出，并按照下方操作步骤进 行培养传代

注意：如为冻存管，请收到后立即解冻培养

 

培养瓶中细胞操作步骤

对于贴壁培养的细胞 ，寄送前 ，我们会将培养基充满整个培 养瓶 ，以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。

1. 收到细胞产品后 ，请注意观察是否有污染 。将培养瓶置于倒置 显微镜下仔细检查是否浑浊、 是否细菌污染 。 因在运输过程

中存在颠簸 ，且有些细胞对温度变化也很敏感 ，可能存在一些 细胞脱落漂浮的情况 ，这些细胞仍是活细胞 ，请勿丢弃 ，可离 心富集后传代使用 。请收集悬浮细胞。

2. 对于贴壁培养的细胞 ，在生物安全柜环境中 ，用真空泵去除  培养瓶中的多余培养基 ，至剩余5-8mL左右 ，随后将细胞置于  含有5% CO2 的37℃恒温 培养箱中培养 。如果细胞已经长满培养 瓶 ，请立即传代，请参考传代培养。

3. 对于悬浮培养的细胞 ，在生物安全柜环境中 ，转移培养瓶中的细胞至离心管中 ，离心200×g / 5 - 10min ，去除上清后 ，用5mL 培养基吹散细胞 ，转移至新的培养瓶中 ，随后置于含有5% CO2的37℃恒温培养箱中培养。

 

冻存细胞操作步骤

注意：为保存细胞的高存活率，请收到产品后，立即解冻培养。

1.将冻存管置于37℃ 水浴中来回晃动，迅速解冻。为避免污染， 确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速，大约2分钟。

2. 一旦冻存管中液体融化后，立即取出，采用 70%酒精喷拭冻存 管表面。从此步开始，后续操作须在生物安全柜中完成。

3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中， 离 心200×g /5 - 10min ，用真空泵去除含有冻存液的上清。

4. 用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证 细胞复苏的存活率，请将培养基在37℃水浴预热后使用。

5. 将细胞置于含有5%CO2 的37℃恒温培养箱中培养。

 

贴壁细胞传代培养

准备：按下表用永生化小鼠树突状细胞包被液（货号：CTCC-001- 0428-CF）对培养器皿进行包被。 37℃包被30min，可在4-8℃保存 2周。

Culture Ware       Area (cm2)    Volume (μL)

96- well plate      0.32              50 μ L

24-well plate         2                250 μ L

12-well plate         4                400 μ L

6-well plate         9                750 μ L

T25                      25                   2  ML

1. 吸取并弃掉培养瓶中培养基。

2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37 ℃培养箱中孵育，直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3  至5分钟（此处为12.5 cm2培养瓶所用体积，可根据实际情况增减 用量）。注意在镜下检测细胞形态，避免消化不足或者过度。

3. 加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶，并轻轻吹打将细胞从培养 瓶表面吹落，并使细胞分散。

4. 离心200x g/5 min，去除上清后，取适量的培养基将细胞重悬, 取适量悬液置于新的培养瓶中，并加入新鲜细胞完全培养基至  总体积为4mL。接种密度40,000  — 60,000/cm2。

5. 将细胞置于含有5%CO 2  的37℃恒温培养箱中培养。

 

 传代比例：建议 1:3。

培养基换液: 每隔 2至 3天。

 

细胞冻存液

细胞冻存液，请使用产品： Cryo Frozen Medium (Cat#CTCC-002-002)

离心收集细胞后，加入适量冻存液（每管细胞冻存量达到10的6次 方），将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱，24h后将冻存管转入液 氮长期保存。

 

完全培养基配制

该细胞系培养所用基本培养基为 RPM I 1640, 配置完全培养基 时需加入 热灭活的20%FBS, 0.05mM 2-

Mercaptoethanol1%Anti-Anti。