支原体检测试剂盒（化学发光法）

产品简介

支原体检测试剂盒（化学发光法）（Luminescent Mycoplasma Detection Kit）是利用支原体中特有酶的活性设计而成，该酶可将支原体检测试剂中特有的底物分解同时将 ADP 转换成 ATP，萤光素酶在 ATP 存在下催化萤光素氧化发出生物萤光，可通过化学发光仪(luminometer)进行测定，以反应待检样品是否存在支原体污染。整个检测过程操作简单，只需两个步骤，耗时约 15min。该方法灵敏度高，检测的是真正具有生物活性的支原体，所以检测结果比 PCR 方法更准确。

产品组分

 

使用方法（仅供参考）

1、取适量（1mL足够）培养3-6天的细胞上清，400g 离心 3min，以去除沉淀少量漂浮细胞或碎片，取上清立即检测，或者 4℃保存在一周内检测，或者-80℃保存半年内检测；

2、所有检测试剂和检测样品均平衡至室温，最适宜的温度为 20-25℃；

3、在96孔检测板（非透明板，建议用96孔白板）中加入50 μL待检测样品、阴性对照（如无菌水或PBS）；

4、加入50μL支原体检测试剂 A，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置5min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为 A。（请根据仪器灵敏度适当调整相应的参数，每个孔的检测时间一般为 0.25-1s）；

5、加入50μL的支原体检测试剂 B，轻柔混匀不要产生气泡，室温（20-25℃）避光放置10min。然后用具有检测化学发光的酶标仪进行化学发光检测，计读数为 B。（注：请严格按照加入支原体检测试剂 B 后10 min 进行检测，不应提前或延后，否则会影响结果判断）；

6、计算比值(Ratio)=读值 B/读值 A。

A. 如果B/A>1.1，说明细胞培养物中存在支原体污染；

B. 如果B/A<0.9，说明细胞培养物中没有支原体污染；

C. 如果B/A 比值在0.9-1.1之间，建议继续培养细胞24-48h后，再次检测确定是否存在支原体污染。

7、如果 B/A 比值仍在 0.9-1.1 之间，则该细胞培养物没有支原体污染，为支原体阴性。

保存条件

-20℃避光保存，一年有效。

注意事项

1、支原体检测试剂 A 中含有萤光素酶，反复冻融会逐渐使其失活，建议第一次解冻后应适当分装保存，分装容器需洁净无污染。

2、检测时强烈建议使用白色或者黑色不透光96孔板，使用透明96孔板会使得相邻检测孔出现干扰。

3、人体皮肤表面含有丰富的ATP，检测时请带好实验手套、口罩，其他耗材也应洁净、无污染，防止外源引入 ATP 污染。

4、为了确保细胞实验的可靠性及稳定性，建议定期进行支原体污染检测。

5、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。