- ￥1599
- 万类生物
- 中国
- WLA079b
- 2025年12月16日
企业认证
相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
100T
产品名称：化学发光法EMSA试剂盒
产品概述：凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核酸相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用于蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究，通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。
注意事项：
1. 需自备0.1%SDS、生物素标记的EMSA探针、非生物素标记的EMSA探针以及相对应的非生物素标记的突变探针，此外还需自备0.5XTBE用于预电泳、电泳以及转膜。
2. 如需做super-shift，需自备用于super-shift的抗体。
3. 本试剂盒包装以5孔为1板胶计算，有20板胶量以及50板胶量规格。
操作流程:
1. 探针退火。用TE缓冲液稀释引物，结合反应前等体积混合两条引物（生物素标记、非生物素标记以及非生物标记的突变探针），94℃退火引物 , 并自然冷却至4℃，待用。
2. 核蛋白提取。请使用万类生物核蛋白和浆蛋白提取试剂盒（WLA020a）具体提取过程请参考说明书。
3. 制备凝胶、电泳。
（1）制备6%的非变性聚丙xi酰an凝胶：（注意根据试剂情况按比例调整总体积）
| 试剂 | 体积 |
| 5XTBE | 1ml |
| 30%Acr–Bis | 2ml |
| 40% Glycerin | 625µl |
| DDW | 3.215ml |
| 10%AP | 150µl |
| TE | 10µl |
| 总计 | 7ml |
4. 形成探针-蛋白复合物。
阴性对照反应
| 试剂 | 体积 |
| DDW | 17.5µl |
| 结合缓冲液（10X） | 2µl |
| 核蛋白提取物 | 0 |
| 生物素标记探针 | 0.5µl |
| 总计 | 20µl |
样品反应
| 试剂 | 体积 |
| DDW | 17.5µl |
| 结合缓冲液（10X） | 2µl |
| 核蛋白提取物 | 4-10µg |
| 生物素标记探针 | 0.5µl |
| 总计 | 20µl |
探针冷竞争反应
| 试剂 | 体积 |
| DDW | 17.5µl |
| 结合缓冲液（10X） | 2µl |
| 核蛋白提取物 | 4-10µg |
| 未标记的探针 | 0.5µl |
| 生物素标记探针 | 0.5µl |
| 总计 | 20µl |
突变探针的冷竞争反应
| 试剂 | 体积 |
| DDW | 17.5µl |
| 结合缓冲液（10X） | 2µl |
| 核蛋白提取物 | 4-10µg |
| 未标记的探针 | 0.5µl |
| 生物素标记探针 | 0.5µl |
| 总计 | 20µl |
super-shift反应
| 试剂 | 体积 |
| DDW | 17.5µl |
| 结合缓冲液（10X） | 2µl |
| 核蛋白提取物 | 4-10µg |
| 目的蛋白特异抗体 | 0.5µl |
| 生物素标记探针 | 0.5µl |
| 总计 | 20µl |
按照上述顺序依次加入各种试剂，在加入标记好的探针前先混匀，并且室温放置10min，从而消除可能发生的探针与蛋白的特异性结合，或者让冷探针优先反应。之后加入标记好的探针，混匀，室温避光放置20-30min。
5. 电泳。加入5X上样缓冲液 5ul混匀，上样10-20ul，100V电泳至溴酚蓝于三分之二处。
6. 转膜。
（1）在预冷的0.5XTBE中浸泡凝胶，尼龙膜，滤纸和纤维垫。
（2）按以下顺序制作“三明治”：纤维垫，滤纸，凝胶，尼龙膜，滤纸，纤维垫。确保凝胶位于阴极，膜位于阳极。
（3）在预冷的0.5XTBE中进行转膜。转膜装置应置于冰上进行，300mA，40min。
7. 交联。转膜后，贴近胶的尼龙膜一面在紫外线下照射30min。
8. 封闭。交联后，加入15ml 封闭液 封闭30min。
9. 孵育。将HRP标记Streptavidin以1:5000稀释于12ml 封闭液中,摇床室温缓慢摇晃孵育20min。
10. 洗膜。
25ml 洗涤液Ⅰ 洗膜5min →25ml 洗涤液Ⅱ 洗膜15min →25ml 洗涤液 Ⅲ 洗膜5min，2次 →25ml 0.1%SDS in 2X检测 平衡液 洗膜5min，2次→25ml 0.1%SDS in 1X检测平衡液 洗膜10min，2次 →25 ml 0.1%SDS in 0.5X检测平衡液 洗膜 5min，2次。
11. ECL发光检测信号。
详情请致电咨询：400-602-0407（转2号键）或登录公司官网 www.wanleibio.cn
风险提示：丁香通仅作为第三方平台，为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全，合理判断，谨慎选购商品，商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品，请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验激活－核转运检测试剂盒仅染色p65，不染色RelB、C-Rel、p50和p52。使用本试剂盒染色后NF-κB呈红色荧光，细胞核呈蓝色荧光.思考信号转导和检测的理论 我做了这样的回答(个人意见.大家可以讨论!)： 这种理论上来讲可行,但是实际操作可能拿不到你想要得结果,原因很简单,凭染色来判断是很难区分程度上的差异的,就比如做WB实验,经典的还是化学发光的方法,显色的方法只能得到信号比较强的蛋白,遇到信号比较弱的蛋白就误差很大了, 第二点,并不是所有能进核的蛋白都有结合DNA
，可以用于化学发光，比色法，荧光法检测实验。 SignalBoostTM 免疫信号增强试剂盒有几大优势： （1）显著改善信噪比，提高低丰度蛋白的检测成功率，得到更好的结果； （2）较传统的方法，最高可以节省高达90%的抗体用量，大大节约了实验成本； （3）使用方便，操作简单。即用型溶液，不需任何前处理，节省时间和精力。 （4）应用面广。可用于WB、ELISA、免疫斑点杂交等检测实验，与化学发光，比色法，荧光法兼容。 这款试剂盒在用户中得到了很好的反馈，帮助很多客户解决了实验当中遇到的问题
I采用了显色法，使用显色底物 NBT/BCIP；而Starter Kit II选用化学发光法底物CSPD。 如果您用来合成探针的DNA模板的量比较少或是质量不够高的时候，建议您使用PCR DIG Probe Synthesis Kit。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针，例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程，通过定量凝胶电泳就可以快速确定PCR标记探针的效率。
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
