化学发光法RNA EMSA试剂盒

碧云天的化学发光法RNA EMSA试剂盒(Chemiluminescent RNA EMSA Kit)，简称化学发光法REMSA试剂盒或Chemiluminescent REMSA Kit，是一种高效、灵敏的通过化学发光法检测生物素(Biotin)标记的RNA EMSA探针及其与蛋白质相互作用的试剂盒。

RNA结合蛋白(RNA binding proteins, RBPs)调控RNA的加工、成熟、运输、稳定性、翻译和降解，以促进细胞的生存和生长[1,2]。研究RNA和蛋白的相互作用对正常的细胞功能和调节至关重要，而这种相互作用的检测通常需要使用放射性标记的RNA探针进行放射性EMSA (Electrophoretic mobility shift assay)或2D蛋白质凝胶电泳(2D protein gel electrophoresis)。EMSA是一种灵敏的技术，是基于DNA/RNA-蛋白复合物在聚丙·烯酰胺凝胶电泳中有不同迁移率的原理，可用于鉴定蛋白质与核酸的相互作用。该技术提供了研究DNA或RNA结合蛋白和鉴定核酸底物的有效方法[3]。在RNA EMSA实验中，末端标记的RNA探针与特定蛋白结合，形成RNA-蛋白复合物。经聚丙·烯酰胺凝胶电泳，RNA-蛋白复合物的迁移速度比游离的RNA探针慢，可以观察明显的位移条带，即可判断RNA和蛋白的相互作用。传统的放射性EMSA技术程序繁琐，耗时较长，需要2-3天才能获得结果。本试剂盒为基于生物素标记探针的非放射性EMSA试剂盒(Biotin-EMSA)，采用了高灵敏度的化学发光技术，利用高质量的Streptavidin-HRP Conjugate和BeyoECL Moon (一种极超敏的以luminol为基础的ECL类化学发光试剂)对生物素标记的RNA探针进行检测，轻松实现了RNA EMSA，实验时间大大缩短，约7-8个小时即可完成。

为验证整个化学发光法RNA EMSA实验条件和体系，本试剂盒提供了阳性对照系统，包含阳性蛋白、生物素标记RNA阳性探针、未标记RNA阳性探针。本试剂盒中的阳性探针与阳性蛋白能很好的结合，产生明显的位移带(Shift band)。使用本试剂盒对于阳性蛋白、HeLa细胞的细胞核蛋白和细胞浆蛋白的RNA EMSA效果参考图1。

图1.碧云天化学发光法RNA EMSA试剂盒(GS606)对阳性蛋白、HeLa细胞的细胞核蛋白和细胞浆蛋白的检测效果图。对于阳性蛋白及HeLa细胞的细胞核蛋白和细胞浆蛋白，包含阴性对照反应(样品1、4、8)、蛋白样本-RNA探针的结合反应(样品2、5、9)和未标记探针冷竞争反应(样品3、6、10)；对于HeLa细胞的细胞核蛋白和细胞浆蛋白，由于含有内源性Biotin标记的蛋白，同时设置了蛋白本身的对照(样品7、11)。对于含有内源性Biotin标记蛋白引起的条带(Endo biotin-protein band)，可以使用碧云天的生物素检测封闭试剂盒(P0101)降低内源性背景，但可能不会完全消除，若实验中目的蛋白较纯或者样品量较大，可缩短曝光时间以降低背景杂带。实际结果会因蛋白种类、纯度、电泳条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

本试剂盒采用了非特异性结合比Avidin更低的Streptavidin，使检测结果背景更低灵敏度更高。

本试剂盒可以用于100个蛋白和探针的结合反应和完整的10次阳性对照结合反应，并足够检测至少10块有生物素标记RNA EMSA探针的膜。

包装清单：

产品编号	产品名称	包装
GS606-1	REMSA Binding Buffer (10X)	120μl
GS606-2	REMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X)	200μl
GS606-3	REMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色，10X)	200μl
GS606-4	BeyoECL Moon A液	55ml
GS606-5	BeyoECL Moon B液	55ml
GS606-6	Streptavidin-HRP Conjugate	100μl
GS606-7	封闭液	380ml
GS606-8	洗涤液(5X)	250ml
GS606-9	检测平衡液	250ml
GS606-10	生物素标记RNA阳性探针	30μl
GS606-11	未标记RNA阳性探针	10μl
GS606-12	阳性蛋白	20μl
—	说明书	1份

保存条件：

-20℃保存，至少一年有效。BeyoECL Moon A液、BeyoECL Moon B液、封闭液、洗涤液(5X)和检测平衡液可以4℃保存，至少一年有效。生物素标记RNA阳性探针和未标记RNA阳性探针最好能在-80℃保存。

注意事项：

操作过程要严格保证无RNase污染。请戴上口罩和手套操作，尽量防止人体表面的RNase污染样品。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒或耗材呼气或说话，以防RNase污染。对于操作环境中RNase的去除，推荐使用碧云天生产的RNase and DNase Away (R0123)以去除实验桌、仪器设备表面或其它接触面上的RNase。

所用试剂和耗材都要求是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。如果耗材可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水溶液浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。

蛋白样品制备过程中样品的稀释等都需使用BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile) (ST876)或DEPC水(DNase、RNase free) (R0022)。

初次实验时可使用试剂盒提供的阳性蛋白、生物素标记RNA阳性探针及未标记RNA阳性探针进行系统测试，确保实验体系正常。

需自备带正电荷尼龙膜，以及凝胶电泳时所需的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN10/FFN11/FFN13/FFN15)可以向碧云天订购。

如果需要使用更多的封闭液或洗涤液，可另外单独订购封闭液(GS009B)或洗涤液(5X) (GS009W)。

BeyoECL Moon A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效，影响后续的使 用效果。

各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。特别是BeyoECL Moon B液，含有氧化剂，比较容易被还原而失效。

BeyoECL Moon A液和B液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。