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- 2026年08月14日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
保存在-20℃，1年。
- 保质期：
保存在-20℃，1年。
- 英文名：
5×Denatured And Non-reducing Gel Sample Loading Buffer
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- 规格：
10ml/100ml
| 规格： | 10ml | 产品价格： | ¥200.00 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100ml | 产品价格： | ¥1000.00 |
5×变性非还原性蛋白上样缓冲液又称非还原性SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(Non-reducingSDS-PAGE Sample Loading Buffer)，是一种经过改良的以溴酚蓝为染料，5 倍浓缩的变性非还原性蛋白上样缓冲液。
本产品中含SDS等变性试剂，但不含DTT、巯基乙醇等还原性试剂。
本产品可以用于非还原性SDS-PAGE蛋白样品的上样。
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文献和实验器上）2 小时。3. 4 ℃ 下在微型离心机中以 16000 × g 离心 20 分钟。轻轻地从离心机中取出离心管，置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中。弃去沉淀。二、样品制备1. 取出小部分 (50 μL) 裂解物，用于蛋白分析。确定每种细胞裂解物的蛋白浓度。2. 向剩余体积的细胞裂解物中加入等体积的 2× Laemmli 样品缓冲液。我们推荐采用以下方法来还原样品和使样品变性，除非在线抗体数据表指明应使用非还原和非变性条件。3. 还原和变性：在 100 ℃ 下将样品缓冲液中的每种细胞裂解物煮沸
或 4℃过夜以捕获免疫沉淀复合物。 离心（3000 rpm，5 min）收集 Agarose 珠子，弃掉上清，用 800 µL-1000µL 预冷的 PBS 缓冲液洗涤珠子 3 次。（小心吸取上清，避免触碰底部珠子） 收集沉淀，加 60 µL 2×SDS 蛋白上样缓冲液中重悬沉淀，轻混均匀后煮沸 5 min，12000 rpm 离心 10 min。 将上清转移至一新离心管，进行 Western 检测。
加入：Labeling 5× buffer 10 μl（含有随机引物）dNTPmix 2 μl(含 dCTP、dGTP、dTTP 各 0.5 mM)BSA（小牛血清白蛋白）2 μl[ a -32 P]dATP 3μlKlenow 酶 5 U3. 将变性模板 DNA 加入到上管中，加 ddH2O 至 50 μl，混匀。室温或 37 ℃ 1 hr。4. 加 50 μl 终止缓冲液终止反应。标记后的探针可以直接使用或过柱纯化后使用。由于 a -32 P 的半衰期只有 14 天，所以标记好的探针应尽快使用。探针的比活性最好
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