DiO (细胞膜绿色荧光探针)

产品简介

DiD，DiO，DiI和DiR染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI（红色荧光），DiO（绿色荧光），DiD（远红外荧光）和 DiR （深红色荧光），这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。

DiO在进入细胞膜之前荧光非常弱，仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiO被激发后可以发出绿色的荧光，最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。 DiO 被广泛用于正向或逆向的，活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂。还被用于检测细胞的融合和粘附，检测发育或移植过程中细胞迁移，通过FRAP检测脂在细胞膜上的扩散，检测细胞毒性和标记脂蛋白等。DiO对于细胞膜染色的荧光强度通常要低于DiI，有时对于某些经过固定的组织的染色效果欠佳。

产品信息

CAS：134215-57-1

英文名：3,3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate

分子式：C53H85ClN2O6

分子量：881.72

纯度：≥95%

使用方法（仅供参考）

一、DiO细胞膜染色液制备

1．配置DMSO或EtOH 储存液：用DMSO或EtOH配置浓度1-5 mM的储存液。

2．工作液制备：用合适的缓冲液（如无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1-5 µM的工作液。

注：工作液的最终浓度是根据不同细胞和实验的经验来配制，可以从推荐浓度的十倍以上寻找最佳条件。  

二、细胞染色

a.对于悬浮细胞

1．悬浮细胞密度为1×106/mL加入到工作液中。

2．在37℃培养细胞5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

3．1000-1500rpm离心5分钟。

4．去除上清，再次缓慢加入37℃预温的培养液。

5．重复步骤3和4，两次以上。

b.对于贴壁细胞

1．吸去多余的培养液。

2．加入染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

3．在37 ℃培养细胞 5～20分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。

4．吸去染料工作液，用培养液清洗2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，培养5～10分钟，然后吸干培养基。

三、结果分析

显微镜下观察或流式细胞仪检测

保存条件

-20℃干燥避光保存，有效期一年。

注意事项

1、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2、Di系列染料是脂溶性染料，在缓冲溶液中容易析出，建议加入表面活性剂（例如F127或者吐温20），终浓度千分之一。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。