重组非洲猪瘟P３０蛋白大肠杆菌细胞原株

【建议】本月讨论与整理专帖-T-A克隆，另开帖不加分！

本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化

重组DNA分子的转化

。 （2）受体细胞： 受体细胞一般要求是具有限制重组缺陷性，而且应与所转化的载体DNA性质相匹配，如pBR322转化大肠杆菌JM83株，其转化率不高于10 3 /mg DNA，但若转化ED8767株，则可获得106 /mg DNA的转化率。 （3）转化操作： 受体细胞的预处理或感受态细胞的制备对转化率影响最大。对于Ca2 诱导的完整细胞转化而言，菌龄、CaCl2 处理时间、感受态细胞的保存期以及热脉冲时间均是很重要的因素，其中感受态细胞通常在12-24小时内转化率最高，之后转化率急剧

【专题讨论】原核表达秘笈之宿主菌株的选择！（接原原核表达研究者关心的10个问题贴）

调节表达产物，使得表达产物量呈现IPTG浓度依赖性。（四环素敏感） 在决定试用这些名字古怪的菌株时，有几个小Tips要注意的（见表），一个是不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性，要注意自己的表达质粒是否能与之兼容。比如Rosetta 2已经携带有氯霉素抗性质粒，不能再用氯霉素筛选等等。 重组质粒和菌株的保存建议 在实验室里保存重组菌株的时候，为了挑菌和传代方便，我们常用LB平板保存在4℃冰箱中，需要提质粒和表达接种的时候，就直接从平板上挑菌，但是这种方法对于重组质粒的稳定