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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
166
- 英文名:
pCambia1300-PacI
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
少量干粉质粒/大提液体质粒
| 规格: | 少量干粉质粒 | 产品价格: | ¥280.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 大提液体质粒 | 产品价格: | ¥480.0 |
别称:Plasmid#44183
基因长:
质粒宿主:植物
质粒用途:蛋白表达
片段类型:ORF
片段物种:空载体
原核抗性:Kan
筛选标记:
荧光标记:
启动子:35S
复制子:pVS1
感受态:DH5a
温度:37度
正向引物:
反向引物:
注意事项:本产品仅供科研使用,不能用于临床试验,包括人体口服、注射或者体外用药。
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文献和实验平板(25-50mg/ml),37℃培养16-20hr. 7、次日挑取平板上长出的菌落(选择最小的菌落),接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基,37℃培养10-15hr。 8、碱裂法提取质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选,大质粒为可能阳性克隆,进一步酶切鉴定。以PacI单酶切,0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段(约30kb),及一条小片段(约3.0或4.5kb)(同时可进行其它酶切鉴定),则基本确定为阳性克隆。 9、取1-5ul 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞(BJ5183
最小的菌落),接种于3ml含25-50mg/ml的LB培养基,37℃培养10-15hr。 8 碱裂法提取质粒,0.8%琼脂糖凝胶电泳筛选,大质粒为可能阳性克隆,进一步酶切鉴定。以PacI单酶切,0.8%琼脂糖凝胶电泳如显示出一条大片段(约30kb),及一条小片段(约3.0或4.5kb)(同时可进行其它酶切鉴定),则基本确定为阳性克隆。 9 取1-5µl 阳性质粒转化至DH5α大肠杆菌细胞(BJ5183为recA+,质粒DNA易发生突变,DH5α或JM109,XL1-blue菌株
的滴度都高。而且可以包装比较大的有毒性作用的基因。这套系统的建立无疑是对国内基因治疗领域的促进,提高了科研效率,降低了科研成本。这套系统的解决了目前重组腺病毒系统的很多技术难题:1. 提高了病毒的滴度。一次大规模扩增,纯化得到的病毒量可以满足上百只裸鼠实验或几十只大鼠实验。2. 可以包装任何有细胞毒性的基因。针对肿瘤的基因治疗经常会选择有细胞毒性的凋亡相关基因来实现杀伤肿瘤细胞的目的。这套系统解决了这样的难题。3. 可以包装内部有PacI位点的插入基因。大多系统都选择PacI酶切线性化viral
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