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- 2025年08月05日
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北京百泰派克生物科技有限公司
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外泌体蛋白浓度
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外泌体蛋白浓度研究进展与技术方法
外泌体作为直径30-150 nm的细胞外囊泡，其蛋白浓度是表征外泌体质量与功能的关键参数。研究表明，每微升外泌体悬液中蛋白含量通常在0.1-10 μg范围内，这一指标直接影响下游应用的可靠性，例如肿瘤标志物筛查、药物递送系统优化或免疫调控机制研究。外泌体蛋白浓度不仅反映样本中囊泡的丰度，还与外泌体来源细胞类型、分离方法及储存条件密切相关。通过高通量质谱分析发现，单个外泌体可携带约20-100种不同dànbáizhì，包括跨膜蛋白（如CD9、CD63）、胞质蛋白（如TSG101）以及核酸结合蛋白，这些分子的定量需要jīngquè的浓度标定。
当前外泌体蛋白浓度检测面临三大技术挑战：一是外泌体样本中常混杂游离蛋白或脂蛋白干扰；二是超离法等传统分离手段可能导致蛋白聚沉；三是不同检测方法（如BCA、Bradford、纳米颗粒跟踪分析）的结果可比性需严格验证。例如，BCA法对去垢剂敏感，而Bradford法易受磷脂干扰，这要求实验者根据样本特性选择适配方案。近期《Journal of Extracellular Vesicles》指出，采用超速离心结合尺寸排阻色谱（SEC）可提升外泌体蛋白浓度检测的特异性，使杂质蛋白占比从30%降至5%以下。
外泌体蛋白浓度的标准化报告需包含三个核心要素：检测方法学细节（如是否使用还原剂）、校准曲线参数（R²≥0.98为佳）以及样本预处理流程（如裂解缓冲液配方）。值得注意的是，外泌体蛋白浓度与颗粒数比值（Protein-to-Particle Ratio）正成为新的质控指标，比值异常可能提示样本污染或外泌体完整性受损。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定，但技术选择应优先考虑方法灵敏度（如微BCA检测限0.5 μg/mL）与样本兼容性。
常见问题：
Q1. 高浓度外泌体样本为何会出现BCA法与质谱定量结果不一致？
A：这主要源于BCA法的显色原理对富含sèānsuān的蛋白响应更强，而外泌体膜蛋白（如CD家族）中该氨基酸分布不均。质谱基于肽段离子流juéduì定量，可避免此类偏差，建议结合两种方法交叉验证。
Q2. 低温保存是否会导致外泌体蛋白浓度检测值衰减？
A：-80℃保存6个月后，外泌体蛋白浓度可能下降15-20%，主要因反复冻融引发囊泡破裂。添加冷冻保护剂（如5%蔗糖）并使用小体积分装可显著改善稳定性，但需注意保护剂可能干扰部分比色法检测。
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文献和实验外泌体（Exosomes）作为当前科研界的热度话题，很多人觉得它很神秘，不知道它在疾病治疗或发生、发展中扮演什么样的角色，今天我们跟大家一起基于文献来探讨一下外泌体具有的功能。 先回顾一下外泌体的基础知识。外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为 30-150 nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。 所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量
细胞上清外泌体细胞上清外泌体提取图解过程 1.核对样本 2.离心，3000g，15min； 3.离心后样本（有略微沉淀） 4.将样本转移至新的 50ml 管并加 ECS 试剂; ECS 与试剂有明显分层； 震荡混匀； 5.在 4 度冰箱静置 2H 以上，离心 10000g，60min； 6.离心后的样本（沉淀明显，沉淀中富含外泌体） 将上清吸出留下沉淀，将离心管倒扣于纸上自然晾干残留的上清液； 7.加 PBS 重悬沉淀； 用 PBS 洗脱后的沉淀 8.离心进一步去除
近年来外泌体是一个比较热的研究点，本节课介绍了外泌体的项目情况、胞外囊泡、Evs理化特征、外泌体组分、外泌体功能等知识点。
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