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现货
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一年
- 供应商:
上海经科化学科技有限公司
- 保存条件:
4℃
- 规格:
1ml
产品介绍
本公司生产的体内mRNA专用转染试剂是一款体内专用型基因转染试剂,可通过肌肉注射的方式将mRNA递送传送至体内并在注射部位高效表达目的蛋白。与其它mRNA专用体内转染试剂相比,具有操作简便、体内毒性低、稳定性好、体内转染效率及蛋白表达量高等优点。
应用范围
该转染试剂可被应用于mRNA疫苗研发或 基因治疗等相关工作的研究中。可用于递送荧光标记的mRNA或具有特殊功能的mRNA,并在体内高效表达。可满足基础科研、初期工艺开发及临床前实验研究使用。
使用方法
体内转染方法
以体重20g小鼠,mRNA注射10µg为例,请参考表1的转染规模调整,步骤如下:
1、试剂准备: 按照表1用量首先取30µL转染试剂放置于样品管中。
2、复合物制备: 取10µL的mRNA(浓度为1µg/µL)与上述转染试剂进行复合。
3、室温静置20分钟。
4、补加葡萄糖注射液: 取80µL的葡萄糖注射液加入到上述复合物溶液中。
5、通过肌肉注射的方式,注射于鼠体内,6-24小时后检测mRNA在鼠体内的蓄积或表达。
体内转染条件的优化
可通过改变mRNA的用量和浓度以及转染试剂浓度对体内分布或蛋白表达情况进行优化。转染试剂 (µL): mRNA(µg)可以在4:1和2:1之间调整。根据鼠体重的不同,葡萄糖注射液的补加体积可以在推荐量±30µL之间调节。优化方法参考表2。使用荧光标记mRNA的活体分布实验,建议在注射后4-6小时开始检测,荧光素酶标记mRNA的活体分布实验,建议在注射后6小时开始检测。
不同体重鼠的体内转染试剂的用量推荐
|
鼠体重 |
葡萄糖注射液补加体积 |
葡萄糖注射液 稀释后终体积 |
mRNA推荐用量 |
|
|
试剂用量 |
mRNA |
|||
|
15g |
88µL |
120µL |
24µL |
8µg |
|
20g |
80µL |
120µL |
30µL |
10µg |
|
25g |
72µL |
120µL |
36µL |
12µg |
|
30g |
60µL |
120µL |
45µL |
15µg |
体重20g鼠的优化复合方式推荐
|
鼠体重 |
葡萄糖注射液补加体积 |
葡萄糖注射液 稀释后终体积 |
mRNA推荐用量 |
|
|
试剂用量 |
mRNA |
|||
|
20g |
112µL |
120µL |
6µL |
2µg |
|
20g |
100µL |
120µL |
15µL |
5µg |
|
20g |
80µL |
120µL |
30µL |
10µg |
|
20g |
40µL |
120µL |
60µL |
20µg |
运输保存
常温运输,2-8℃可保存一年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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文献和实验棕色小玻璃瓶,标准包装10mg,20mg,50mg,100mg,或根据客户要求提供相应包装
。所以,一些普通的体外转染试剂是不支持进行体内转染的。 如果需要在动物体内采用转染 试剂进行转染,这要求:1.转染试剂能耐受体内复杂的环境,不会被体内免疫系统识别清除,产生免疫反应。2.转染试剂效率要高,毒性要低,众所周知,原代细胞比传代细胞要难转染得多,而体内转染又要比体外转染要难。所以转染的效率一定要高,同时,毒性要低,这样才能产生显著的转染效果,以利于实验观察。 英格恩生物近期推出的动物体内专用转染试剂EntransterTM-in vivo,非脂质体,采用纳米技术合成,能耐受体内
用它的Silencer siRNA Cocktail Kit(RNase III)试剂盒成功关闭几个基因,包括c-fos, GAPDH, La, ?-actin, 和Ku-70。最适用于:快速而经济地研究某个基因功能缺失的表型不适用于:长时间的研究项目,或者是需要一个特定的siRNA进行研究,特别是基因治疗体内表达前面的3种方法主要都是体外制备siRNAs,并且需要专门的RNA转染试剂将siRNAs转到细胞内。而采用siRNA表达载体和基于PCR的表达框架则属于:从转染到细胞的DNA模版中在体内转录得到siRNAs
mRNA 区域设计 siRNA。 2.选择 GC 含量低的 siRNA 研究人员发现 G/ C 含量 40–55% 的 siRNA 活性比 G/ C 含量高于 55% 的高。 3.纯化体外转录的 siRNA 确保所有用于转染的 siRNA 大小和纯度。为了实现最高级别的纯度,我们建议使用玻璃纤维过滤器结合和洗脱,或用凝胶纯化。所用的凝胶为 15- 20% 的丙烯酰胺凝胶,以除去反应体系中多余的核苷酸、短低聚物、蛋白质和盐。注意:化学合成的 RNA 通常需要通过凝胶电泳进行纯化。 4.谨防RNA
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