石蜡包埋组织切片注意事项

石蜡包埋组织切片注意事项

石蜡包埋组织切片是组织学研究和病理诊断中的关键技术，其质量直接影响后续染色、免疫组化及分子检测的结果。为确保切片质量，需严格把控样本处理、脱水、透明、浸蜡、包埋及切片等关键步骤。首先，组织固定必须充分，通常采用10%中性缓冲福尔马林，固定时间依组织大小而定，一般不超过24小时，以避免过度固定导致抗原表位破坏。固定不充分可能导致组织自溶，而固定过度则可能增加切片脆性。其次，脱水过程需梯度酒精逐级进行（如70%、80%、95%、100%），每步时间需根据组织类型调整，避免脱水不足导致石蜡渗透不佳或脱水过度引起组织收缩。透明剂（如二甲苯）的使用需严格控制时间，过长会导致组织变脆，过短则影响石蜡浸透。浸蜡时，石蜡熔点的选择（通常56-60℃）需与后续实验匹配，高温可能导致组织硬化和抗原损伤。包埋方向需考虑组织结构（如肠黏膜应垂直包埋），并确保无气泡残留。切片厚度通常为3-5μm，过厚可能影响显微镜观察，过薄则易碎裂。切片时需保持刀片锋利，并采用抗卷板防止皱褶。具体费用需要根据实验需求和样品情况来确定。

组织切片的质量还依赖于环境条件。切片室温度应维持在20-24℃，湿度过高可能导致切片粘连，湿度过低则易产生静电吸附。切片后的展片水温需控制在42-45℃，水温过高可能使组织展开过度，过低则无法充分展平。载玻片需预先涂覆多聚赖氨酸或APES以防脱片。对于特殊组织（如脂肪或骨组织），需延长脱水时间或采用脱钙处理。此外，石蜡包埋组织切片的长期保存需避免高温和阳光直射，建议置于干燥器中存放。

在操作过程中，实验人员的熟练程度也至关重要。新手易出现的问题包括切片厚度不均、组织撕裂或折叠，这些可通过调整切片机参数（如进样速度）和练习手法改善。对于珍贵或微小样本，建议先进行预实验优化条件。石蜡包埋组织切片的注意事项还包括定期维护切片机，清洁蜡槽，避免交叉污染。

常见问题：

Q1. 石蜡包埋后组织切片出现裂隙或破碎，可能原因是什么？

A：常见原因包括脱水不chèdǐ（残留水分导致石蜡渗透不均）、浸蜡时间不足、石蜡熔点过高或组织本身纤维化。可尝试延长脱水时间、优化浸蜡程序或更换低熔点石蜡。

Q2. 免疫组化染色时石蜡切片易脱片，如何解决？

A：脱片通常与载玻片未充分包被或抗原修复条件过激有关。建议使用阳离子包被玻片（如多聚赖氨酸），并在抗原修复时控制pH值（6.0-9.0）和温度（避免沸腾）。