2× Ex Taq PCR ProMix

PCR 不必“摸条件”

bp 片段，以 pBS 菌液为模板扩增 1500 bp 片段。 模板：菌液 OD600=0.8 时 2 μL /50 μL PCR 扩增程序：同上 a 扩增程序同。 结果：Bioteke 2×power Taq PCR MasterMix 试剂对于质粒或菌液均可高效率的扩增。取扩增产物 10 μL 用 1% 琼脂糖凝胶电泳进行分析可见明亮条带。 二、genomic DNA扩增 1．大肠杆菌DNA扩增 模板：大肠杆菌DNA 50 ng/50 μL PCR扩增程序： 循环数 Step 温度

PCR和RT-PCR

PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到。反应包括几个成分（表1）。模板可以为纯化的基因组或质粒DNA；由RNA转化得到的cDNA；或未经纯化的粗制生物样品，如细菌克隆或噬菌斑。引物确定了扩增产物的序列和长度。最常用的热稳定聚合酶是Taq DNA

real-time PCR技术的原理及应用

分析.4、几个概念：（1）扩增曲线 ：（2） 荧光阈值：（3）Ct值：CT值的重现性：5、定量原理：理想的PCR反应： X=X0*2n非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)nn：扩增反应的循环次数X：第n次循环后的产物量X0：初始模板量Ex：扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1）确定未知样品的 C(t)值2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍 方法一：SYBR Green法 （一）工作原理 1、SYBR Green  能结合到双链DNA的小沟