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土壤硝酸还原酶(S-NR)试剂盒

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  • ¥580
  • wksubio
  • WS9030F
  • 国内
  • 2025年07月21日
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    • 英文名

      Soil Nitrate Reductase (S-NR) Kit

    • CAS号

      WS9030F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      24T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤硝酸还原酶(Solid-Nitrate ReductaseS-NR)试剂盒说明书
    (货号:WS9030F 分光法 24 )
    一、产品简介:
    土壤硝酸还原酶可以把土壤中的硝酸盐转变为亚硝酸盐,然后再通过亚硝酸还原酶的作用
    转变成氮循环的重要原料-铵,从而调节氮代谢,并影响到光合碳代谢,进而影响植物生长。
    本试剂盒提供一种快速、精确的测定方法,土壤硝酸还原酶催化硝酸盐还原为亚硝酸盐;
    同时抑制亚硝酸还原酶对产生的亚硝酸盐的降解,亚硝酸盐与对应的显色剂反应生成(粉)
    红色偶氮化合物;该物质在 540nm 有最大吸收峰,进而得出土壤硝酸还原酶的活性。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格试剂名称
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 15mL×1
    4℃保存
    试剂二
    液体 3mL×1
    4℃保存
    试剂三
    液体 30mL×1
    4℃保存
    试剂四
    液体 14mL×1
    4℃保存
    试剂五
    A 12mL×1
    4℃保存
    临用前,可依据待检测样本数量,
    A液和B液等比例混合成无色
    反应 mix(注意观察,若变粉色,
    则不能使用)。 两天之内用完。
    B 12mL×1
    标准品
    粉体 mg×1
    4℃保存
    若重新做标曲,则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、水浴锅、台式离心机、可调式移液器。
    四、土壤硝酸还原酶(S-NR)的测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备
    取新鲜土样风干或者 37 度烘箱风干,先粗研磨,过 40 目筛网,备用。
    【注】:土壤风干,减少土壤中水分对于实验的干扰;土壤过筛,保证取样的均匀细腻;
    2、测定步骤
    ① 可见分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
    ② 在 1mLEP 管中依次加入:
    试剂名称(
    μL
    测定管
    对照管
    风干土样(
    g
    0.25
    0.25
    试剂一
    200
    200
    试剂二
    50
    50
    蒸馏水
    250
    250
    混匀,且务必用封口膜封
    口。25℃培养 24h
    混匀,且务必用封口膜封口。-20℃培
    24h(可放在-20℃冰箱)
    试剂三
    500
    500
    混匀,12000rpm4℃离心 10min,上清液待用本试剂盒仅供科研使用
    2
    ③ 显色反应,在 EP 管中依次加入:
    上清液
    160
    160
    试剂四
    240
    240
    反应 mix
    400
    400
    混匀,25℃反应 5min(准确时间),全部液体转移至 1mL 玻璃
    比色皿(光径 1cm)中,立即540nm 处读取 A 值,A=A
    -A 对照(每个样本做一个自身对照管)。
    【注】:若A 值低于 0.01,可增加③ 步中上清液的体积(如由 160μL 增至 300μL,则试剂四减至 100μL
    保持总体积仍为 800μL)。
    五、结果计算:
    1、标准曲线方程:y = 6.5179x - 0.0065x 为标准品浓度(
    μmoL/mL),y 为吸光值A
    2、单位定义:每天每克土样中产生 1μmoL NO2 ˉ的量为一个 酶活力单位。
    S-NR(μmoL/d/g 干土)=[(A+0.0065)÷6.5179×V1]÷W÷T
    =0.153×(A+0.0065)÷W
    3、单位定义:每天每克土样中产生 1μg NO2 ˉ的量为一个酶活力单位。
    S-NR(μg/d/g 干土)=[(A+0.0065)÷6.5179×V1]÷W÷T×46
    =7.06×(A+0.0078)÷W
    V1----反应体系总体积,1mL
    T----反应时间,24h=1dW----样本实际质量,g
    标准品的分子量---69
    NO2 -的分子量---46
    附:标准曲线制作过程:
    1 制备标准品母液(100μmol/mL):把标准品完全溶解于 1mL 蒸馏水中(母液需在两
    天内用且-20℃保存)。
    2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度标准品:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16, 0.2. μmol/mL
    也可根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 依据显色反应阶段的测定管的加样顺序操作,根据结果即可制作标准曲线。

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