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土壤碱性磷酸酶(S-AKP/ALP)试剂盒

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  • ￥360
  • wksubio
  • WS5030F
  • 国内
  • 2026年01月06日
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    • 英文名：

      Soil Alkaline phosphatase (S-AKP/ALP) Kit

    • CAS号：

      WS5030F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性测定试剂盒说明书
    (货号：WS5030F 分光法 48 样)
    一、产品简介：
    土壤磷酸酶对土壤磷素的有效性具有重要作用，是评价土壤磷素生物转化方向和强度的
    指标，也与土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 有一定的关系。
    本试剂盒提供一种简单、灵敏、快速的检测方法。在酸性环境中，土壤酸性磷酸酶
    （S-ACP）催化磷酸对硝*苯酯（PNP P）生成黄色对硝*苯酚（PNP），该产物在 405nm
    处有最大吸收峰。通过检测 PNP 在 405nm 下的增加速率，即可得到 S-ACP 酶活性大小。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    试剂一
    液体 55mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前加 10mL 试剂一充分溶解，
    现配先用，一周内用完。
    试剂三
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    标准品
    粉剂 mg×1 支
    4℃保存
    若重新做标曲，则用到该试剂
    三、所需的仪器和用品：
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、恒温培养箱、分析天平、
    可调式移液器、蒸馏水、甲苯。
    四、土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
    样本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    取新鲜土样或干土（风干或者 37 度烘箱风干），先粗研磨，过 40 目筛网备用。
    2、上机检测：
    ① 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 405 nm，蒸馏水调零。
    ② 在离心管中依次加入下列试剂：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    对照管
    空白管
    （只做一次）
    土样
    0.1g 鲜土或
    0.05g 干土
    0.1g 鲜土或
    0.05g 干土
    甲苯
    10
    10
    10
    试剂一
    290
    490
    290
    试剂二
    200
    200
    混匀， 37℃（水浴锅或恒温培养箱）振荡反应 1h
    试剂三
    300
    300
    300
    混匀，12000rpm 室温离心 10min，上清液全部转移至 1mL 玻璃
    比色皿（光径 1cm）中，于 405nm 下读取各管吸光值 A，△A=A
    测定-A 对照-A 空白（每个测定管需设一个对照管）。
    【注】：1.最后一步检测时，若有结晶析出，需要 37℃复溶再读取吸光值。
    2.若ΔA 在零附近徘徊，可延长 37℃的孵育时间 T（如增至 4 小时或更长），或增加
    土样质量 W（如增至 0.2g）。则改变后的 T 和 W 需代入计算公式重新计算。本试剂盒仅供科研使用
    2
    3.若测定管 A 值大于 1.5 或△A 大于 1.5，可缩短 37℃的孵育时间 T（如减至 0.5 小时或更短）。
    则改变后 T 需代入计算公式重新计算。或对最后一步的待检测上清液（包括测定管、对照管
    和空白管）同时用蒸馏水进行稀释，稀释倍数 D 代入计算公式。
    4.若同时检测一大批同一背景下土壤样本（如都是黄土，黑土，红土，黄土等），可做三次样
    本自身对照管（取平均值作为这批土壤样本的对照管），可从称样到检测步骤节省检测时间。
    五、结果计算：
    1、标准曲线：y = 0.0197x - 0.004；x 是 PNP 摩尔质量（nmol），y 是△A。
    2、定义：每克土壤每小时水解 PNP P 产生 1nmol 对硝*苯酚（PNP）为一个酶活单位。
    S-ACP(nmol/h/g 土样)=[(△A+0.0004)÷0.0197]÷W÷T×D=50.8×(△A+0.0004)÷W×D
    D---稀释倍数，未稀释即为 1；
    W---土壤样品质量，g；
    T---催化反应时间，1h；
    PNP 相对分子质量---139.11。
    附：标准曲线制作过程：
    1 制备标准品母液（10μmol/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1.4mL 蒸馏水超声溶解，
    若有结晶析出，需 37℃水浴至完全溶解。
    2 把母液用蒸馏水稀释成以下浓度梯度的标准品：0, 1.6, 3.2, 4.8, 6.4, 8 μmol/mL。也可
    根据实际样本来调整标准品浓度。
    3 在 EP 管中直接加入：10μL 标准品+490μL 试剂一+300μL 试剂三，混匀，取出全部
    上清液至 1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）中，于 405nm 下读取吸光值。
    4 根据结果制作标准曲线。

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