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单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)试剂盒

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  • ￥850
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  • WS3120F
  • 国内
  • 2025年10月20日
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    • 英文名：

      Single Dehydroascorbic acid Reductase (MDHAR) Kit

    • CAS号：

      WS3120F

    • 保质期：

      3个月

    • 供应商：

      上海瓦兰生物

    • 保存条件：

      4℃

    • 规格：

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）试剂盒说明书
    （货号：WS3120F 紫外法 48 样）
    一、产品简介：
    单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR，EC 1.6.5.4 ）是使抗坏血酸（AsA）再生的关键酶之
    一，催化 MDHA 重新还原成 AsA，对于维持抗坏血酸的抗氧化特性具有重要作用。
    MDHAR 催化 NADH 还原 MDHA 生成 AsA 和 NAD+，通过测定 NADH 在 340 nm 处
    的光吸收下降速率，来计算出 MDHAR 活性。
    二、试剂盒组分与配制：
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂一
    液体 30mL×1 瓶
    4℃保存
    试剂二
    粉剂 mg×4 支
    -20℃保存
    临用前每支加 1.1mL 蒸馏水充分溶
    解，仍-20℃保存，且一周内用完
    试剂三
    粉剂 mg×1 瓶
    4℃保存
    临用前加 5.1mL 的蒸馏水溶解
    试剂四
    液体 0.22mL×2 支 -20℃保存
    先离心，使微量液体至离心管底部，
    禁止反复冻融
    三、所需的仪器和用品：
    紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、研钵、冰、台式离心机、可调式移液
    枪、水浴锅。
    四、单脱氢抗坏血酸还原酶（MDHAR）活性测定：
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样
    本和试剂浪费！
    1、样本制备：
    ① 组织样本：
    建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。12000rpm，4℃离心 10min，
    取上清，置冰上待测。
    【注】：若增加样本量，可按照组织质量（
    g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
    ② 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。
    2、上机检测：
    ① 紫外分光光度计预热 30 min，设置温度 25℃，调节波长到 340 nm，蒸馏水调零。
    ② 试剂一在 25℃水浴锅中预热 30 min。
    ③ 在 1mL 石英比色皿中依次加入：
    试剂名称（
    μL）
    测定管
    样本
    80
    试剂一
    552
    试剂二
    80
    试剂三
    80
    试剂四
    8
    轻轻混匀，于 340nm 处检测，分别于 10S 和
    5min10S 读取吸光值 A1 和 A2，△A=A1-A2。
    【注】1.若△A 的值在零附近，可以适当延长反应时间到 10min30s 读取 A2，改变后的反应时间需
    代入计算公式重新计算。或适当加大样本量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    2. 若起始值 A 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对会偏高），本试剂盒仅供科研使用
    2
    可以适当减少样本加样量，则改变后的加样体积需代入计算公式重新计算。
    3. 若下降趋势不稳定，可以每隔 10S 读取一次吸光值，选取一段线性下降的时间段来参与计
    算，相对应的 A 值也代入计算公式重新计算。
    五、结果计算：
    1、按蛋白浓度计算
    活性定义：在 25℃反应条件下，每毫克蛋白每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
    MDHAR (nmol/min /mg prot) = [△A÷ε÷d×V2×109]÷（Cpr×V1）÷T
    = 321.5×△A ÷Cpr
    2、按样本质量计算
    活性定义：在 25℃反应条件下，每克样本每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
    MDHAR (nmol/min /g 鲜重) = [△A÷ε÷d×V2×109]÷（W×V1÷V）÷T
    = 321.5×△A ÷W
    3、按液体体积计算
    活性定义：在 25℃反应条件下，每毫升液体每分钟氧化 1nmol NADH 为 1 个酶活单位。
    MDHAR (nmol/min /mL) =[△A÷ε÷d×V2×109]÷V1÷T
    =321.5×△A
    ε---NADH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm；
    d---96 孔板光径，1cm；
    V---提取液体积，1 mL；
    V1---加入样本体积，80μL=0.08mL；
    V2---反应体系总体积，800μL=8×10-4L；
    W---样品质量；
    T---反应时间，5min；
    Cpr---上清液蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。

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