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高铁还原酶(FCR)活性测定试剂盒

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  • ¥490
  • wksubio
  • WS7410F
  • 国内
  • 2026年02月18日
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    • 英文名

      High iron reductase (FCR) activity assay kit

    • CAS号

      WS7410F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    高铁还原酶(Ferric reductase,FCR)活性测定试剂盒说明书
    (货号:WS7410F 分光法 48 样)
    一、产品简介:
    高铁还原酶(Ferric reductaseFCR)催化高铁螯合物中的 Fe3+还原为 Fe2+,在部分物
    种铁元素的吸收中有重要作用。
    高铁还原酶(FCR)可以催化 Fe3+还原为 Fe2+Fe2+再与亚铁嗪(ferrozine)生成紫红
    色化合物,该有色物质在 562nm 处有特征吸收峰,通过测定在 562nm 下的增加速率即
    可得出该酶活大小。
    二、试剂盒组分与配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1
    4℃保存
    试剂一
    粉体×2
    4℃保存
    用前甩几下或离心使粉剂落入底
    部,分别加1.1mL蒸馏水溶解备用。
    用不完的试剂分装后-20℃保存,禁
    止反复冻融,三天内用完。
    试剂二
    液体×2
    4℃保存
    试剂三
    粉体×1
    4℃保存
    临用前甩几下使粉体落入底部,再
    2.4mL 蒸馏水溶解备用。
    试剂四
    液体 25mL×1
    4℃保存
    试剂五
    液体×1
    4℃保存
    标准品
    液体 1mL×1
    4℃保存
    三、所需仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、可调式移液器、水浴锅或恒温培养
    箱、低温离心机、蒸馏水。
    四、高铁还原酶(FCR)活性测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、 样本制备:
    ① 组织样本:
    取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液,进行冰浴匀浆。4×12000rpm 离心 5min,取上
    清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取。
    ② 细菌/细胞样本:
    先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;取约 500 万细菌或细胞加入 1mL
    提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
    12000rpm 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
    【注】:若增加样本量,可按照细菌/细胞数量(104):提取液(mL)为 500~10001 的比例进行提取。
    ③ 液体样本:澄清的液体可直接检测;若浑浊则离心后取上清液检测。
    2、上机检测:
    ① 可见分光光度计预热 30min,设定波长到 562nm,蒸馏水调零。
    ② 所有试剂解冻至室温(25℃),在 1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)中依次加入:本试剂盒仅供科研使用
    2
    【注】若△A 的值在零附近,可增加样本加样体积 V1(如增至 240μL,则试剂四相应减少);
    或延长反应时间 T(如增至 60min);或增加样本取样质量 W;则改变后的 V1T W
    需代入计算公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、标准曲线:y = 0.0249x - 0.0087x 为标准品摩尔质量(nmoL)y ΔA
    2按样本鲜重计算:
    单位定义:每克组织每分钟催化生成 1nmoL Fe2+定义为一个酶活单位(U)。
    FCR (nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0087)÷0.0249]÷(W×V1÷V)÷T=8.4×(ΔA+0.0087)÷W
    3、按样本蛋白浓度计算:
    单位定义:每毫克组织蛋白每分钟催化生成 1nmoL Fe2+定义为一个酶活单位(U)。
    FCR (nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0087)÷0.0249]÷(V1×Cpr)÷T=8.4×(ΔA+0.0087)÷Cpr
    4、按照液体体积计算:
    单位定义:每毫升液体每分钟催化生成 1nmoL Fe2+定义为一个酶活单位(U)。
    FCR (nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0087)÷0.0249]÷V1÷T=8.4×(ΔA+0.0087)÷Cpr
    V---加入提取液体积,1 mL
    V1---加入样本体积,0.16mL
    T---反应时间,30min
    W---样本质量,g
    500---细菌/细胞数量,万;
    Cpr---样本蛋白质浓度,mg/mL,建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
    附:标准曲线制作过程:
    1 标准品母液(15μmoL/mL);把母液用蒸馏水稀释成以下浓度:0, 0.04, 0.08, 0.12, 0.16,
    0.2μmoL/mL。也可根据实际来调整浓度。
    2 40μL 标准品+10μL 试剂三+150μL 试剂四,混匀,室温静置 5min 后于 562nm 处读
    取吸光值 A,依据结果即可制作标准曲线。
    试剂名称(
    μL
    测定管
    样本
    160
    试剂一
    40
    试剂二
    40
    试剂三
    40
    试剂四
    480
    试剂五
    40
    充分混匀,于波长 562nm 处读取吸光值 A1
    室温(25℃)孵育 30min 后读取 A2
    A=A2-A1

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