本试剂盒仅供科研使用
总抗氧化能力（T-AOC)说明书（FRAP 法）试剂盒说明书
（货号：WS5110F 分光法 48 样）
一、产品简介：
FRAP 法常用于血浆、血清、唾液、尿液等各种体液，细胞或组织等裂解液、植物或
中草药抽提液、或各种抗氧化物溶液的总抗氧化能力的检测。即在酸性环境下，抗氧化
物可以还原 Fe3+ -三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)产生蓝色的 Fe2+-TPTZ，随后在 590nm 测定蓝
色的 Fe2+-TPTZ 即可获得样品中的总抗氧化能力。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
试剂一
液体 45mL×1 瓶
4℃保存
试剂二
液体 4.5mL×1 瓶
4℃保存
试剂三
液体 4.5mL×1 瓶
4℃保存
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂
三、需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、恒温水浴锅、低温离心机、可调式移
液器、研钵、蒸馏水。
四、总抗氧能力测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：
称取 0.1g 样本（若是干样可取 0.02-0.05g），加入 1mL 的 80%乙醇（自备）进行匀浆，
匀浆后转入 2mL 离心管中；于 60℃，200-300W 条件下超声提取 30min（间隔 5min 振
荡混匀一次）。12000rpm，离心 10min，取上清，置冰上待测。
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 的 80%
乙醇（自备）进行匀浆；匀浆后转入 2mL 离心管中；于 60℃，200-300W 条件下超声
提取 30min（间隔 5min 振荡混匀一次）；12000rpm，离心 10min，取上清置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液（mL）为 1:1000~5000 比例进行提取。
③ 液体样本：水溶性样本可直接检测。若是油性样本，可用 80%乙醇溶解后再取上清
检测。
2、上机检测：
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长至 590nm，蒸馏水调零。
② 显色液配置：将试剂一、试剂二、试剂三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃预温，
现配现用，注意避光。
③ 不同样本抗氧化能力不一，可先选取 2 个样本做检测，若 A 测定超过 1.8，需对样
本用 80%乙醇稀释，稀释倍数 D 代入公式计算。
④ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
空白管（只做一次）
样本
75
0本试剂盒仅供科研使用
2
蒸馏水
75
150
显色液
850
850
混匀后，室温 25℃，准确反应 10min，于 590nm 处读取吸
光值 A；△A=A 测定-A 空白。
【注】 若△A 的值在零附近，可增加样本量 V1（如增至 15μL，则蒸馏水相应减少），
则改变后的 V1 需代入公式重新计算。
五、结果计算：
1、标准曲线：y = 0.0375x-0.0262，x 是标准品 Trolox 摩尔质量（nmol），y 是△A。
2、定义：用从标准曲线上获得的抗氧化剂 Trolox 的量来表示样本的总抗氧化能力。
3、按样本质量计算：
总抗氧化能力(μmol Trolox/g 鲜重)=[(△A+0.0262)÷0.0375×10-3]÷(V1÷V×W)×D
=0.36×(△A+0.0262)÷W×D
4、按细菌或细胞数量计算：
总抗氧化能力(nmol Trolox/104 cell)=[(△A+0.0262)÷0.0375]÷(V1÷V×500)×D
=0.711×(△A+0.0262)×D
5、液体样本计算：
总抗氧化能力(μmol Trolox/ mL)=[(△A+0.0262)÷0.0375×10-3]÷V1×D
=0.36×(△A+0.0262)×D
V----加入提取液体积，1 mL；
V1----反应中样品体积，75μL=0.075 mL；
W----样品质量，g；
Trolox 分子量----250.29；
D---稀释倍数，未稀释即为 1；
500---细菌或细胞总数，万；
Cpr----样本蛋白浓度，mg/mL，建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。
【注意】：
1. 由于本方法是显蓝色测定吸光值，因此尽量避免使用在酸性条件下呈蓝色或接近蓝色的
试剂，否则对本试剂盒的检测结果产生干扰。
2. 样本中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢剂和 DTT、巯基乙醇等影响氧化还原反
应的还原剂。
3. 如果样品测定出来的吸光值在标准曲线范围以外，需把样品适当稀释或浓缩后再进行测
定。
4. 如果样本中处理过程中施加了较高浓度的铁盐或亚铁盐，会干扰测定，不宜使用本测试
方法。
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（
4μmol/mL=4nmol/μL）：临用前加 1mL 甲醇，充分溶解混匀。
2 把母液用提取液稀释成以下浓度梯度的标准品：0,0.16,0.32,0.48,0.64,0.8 nmol/μL。
3 按照测定管加样体系操作，依据结果即可制作标准曲线。
文献和实验
技术资料