本试剂盒仅供科研使用
氧化型谷胱甘肽（GS *SG）含量测定试剂盒说明书
（货号：WS7020F 分光法 48 样）
一、产品简介：
谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GS* SG)。
因此GSH/GS* SG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。
本试剂盒含有 GSH 掩蔽剂，加入掩蔽剂可以除去样品溶液中的 GSH，并在谷胱甘肽还原酶作用下使
氧化型谷胱甘肽（GS *SG）转化为还原型谷胱甘肽（GSH），进而与 DTNB 与反应生成在 412nm 处有特
征吸收峰的复合物；进而对 GS * SG 进行定量。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
提取液
液体 60mL×1 瓶
4℃保存
试剂一
液体μL×1 支
4℃保存
临用前取 45μL 的试剂一至一支新的
EP 管中，加 1.5mL 的乙醇混匀后测定
（共配制 2 支即可）。
试剂二
EP 管×2 支
-20℃保存
用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管
底部，每支加 0.6mL 蒸馏水溶解备用。
用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止
反复冻融，一星期内用完。
试剂三
EP 管×1 瓶
4℃保存
若凝固，可在 25℃水浴温育片刻至全
部融解后使用。
试剂四
液体 28mL×1 瓶
4℃保存
试剂五
液体 10μL×1 支
-20℃保存
用前甩几下或4℃离心使试剂落入试管
底部，再加 1.1 mL 蒸馏水溶解备用。
标准品
粉体 mg×1 支
4℃保存
若重新做标曲，则用到该试剂。
三、所需的仪器和用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、可调节移液
器、蒸馏水。
四、氧化型谷胱甘肽（GS SG）含量的测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验
样本和试剂浪费！
1、样本制备：
① 组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离
心 15min，取上清液，置冰上待测。
【注】:根据研究需求，可按组织质量（
g）：提取液体积(mL)为 1：10 的比例进行提取。
② 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细
胞加入 1mL 提取液；超声波破碎细菌或细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总
时间 3min）；4℃×12000rpm 离心 15min，取上清液，置冰上待测。
【注】:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例提取
③ 液体样本：直接检测。若浑浊，离心后取上清检测。
2、上机检测
① 可见分光光度计预热 30min，调节波长到 412nm，蒸馏水调零。
② 所有试剂在使用前需在 25℃水浴中保温 10min。若批量测定则试剂二和三和四可按照本试剂盒仅供科研使用
2
20:40:520 配成混合液，按照 580μL 加样量操作。
③ 在 1mL 玻璃比色皿中依次加入：
试剂名称（
μL）
测定管
样本
80
试剂一
40
轻轻混匀，孵育 10 分钟
试剂二
20
试剂三
40
试剂四
520
试剂五
20
混匀，室温（25℃）下，立即于 412nm 读取吸光值
A1，25min 后读取吸光值 A2，ΔA= A2-A1。
【注】1.若△A 在零附近徘徊，可增加样本加样量（如增至 160μL），则试剂四相应减少，
保持反应总体积 720μL 不变。
2.严格控制反应时间于 25min 读值。
五、结果计算：
1、标准曲线方程为 y = x + 0.0023；x 为标准品质量（nmol），y 为ΔA。
2、按样本鲜重计算：
GS SG(nmol/g 鲜重)=(ΔA-0.0023)÷1÷(W×V1÷V)=12.5×(ΔA-0.0023) ÷W
3、按细胞数量计算：
GS SG(nmol/104 cell)=(ΔA-0.0023)÷1÷(细胞数量×V1÷V)=12.5×(ΔA-0.0023)÷细胞数量
4、按照液体体积计算：
GS SG(nmol/mL)=( ΔA-0.0023)÷1÷V1=12.5×(ΔA-0.0023)
V---加入提取液体积，1mL；
V1---反应中加入样本体积，80μL =0.08mL；
W---样品质量，g；
附：标准曲线制作过程：
1 制备标准品母液（10μmol/mL）：标准品溶于 1.06mL 蒸馏水中，（母液需在两天内
用且-20℃保存）。
2 把母液用蒸馏水稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5 nmol/mL。也可根据实
际样本来调整标准品浓度。
3 依据测定管的加样体系操作，根据结果即可制作标准曲线。
【注意事项】：
1. 粗提液不能用于测定可溶性蛋白含量。
2. 一些还原剂如抗坏血酸，巯基乙醇，二硫苏糖醇 (D TT) 和半胱氨酸，或巯基反应性化合物如马来
酰亚胺化合物会干扰谷胱甘肽测定。因此在样品制备过程中应避免使用这些物质。
文献和实验
