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总抗坏血酸(TAA)含量测定(红菲咯啉法)

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  • ¥580
  • wksubio
  • WS5120F
  • 国内
  • 2026年01月12日
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    • 英文名

      Determination of Total Ascorbic Acid (TAA) Content (Red Phenanthroline Method)

    • CAS号

      WS5120F

    • 保质期

      3个月

    • 供应商

      上海瓦兰生物

    • 保存条件

      4℃

    • 规格

      48T

    本试剂盒仅供科研使用
    总抗坏血酸(TAA)含量测定试剂盒说明书
    (货号:WS5120F 分光法 48 样)
    一、产品简介:
    总抗坏血酸(TAA)包括还原型和脱氢型抗坏血酸,其中脱氢抗坏血酸被还原为还原型
    抗坏血酸,接着还原型抗坏血酸把三价铁离子还原成二价铁离子,二价铁离子与红菲咯啉
    反应生成红色络和物,在 534nm 处有特征吸收峰,颜色深浅与还原型抗坏血酸含量成正
    比,继而计算得出总抗坏血酸的含量。
    二、试剂盒的组成和配制:
    试剂名称
    规格
    保存要求
    备注
    提取液
    液体 60mL×1
    4℃保存
    试剂 a
    液体 2.5mL×1
    4℃保存
    试剂 b
    液体 20mL×1
    4℃保存
    试剂 c
    液体 5mL×1
    4℃保存
    试剂一
    液体 15mL×1
    4℃保存
    试剂二
    A:液体×1
    试剂瓶 B(空瓶)
    4℃保存
    试 剂 二 B 液 配 制 : 临 用 前 取
    0.024mLA 液至试剂瓶 B 中,再加
    4.976mL 无水乙醇,混匀备用。
    试剂三
    粉体 mg×1
    4℃保存
    用前甩几下使粉体落入底部,再
    加 10mL 无水乙醇混匀溶解(该
    试剂难溶,可超声溶解)。
    试剂四
    液体 5mL×1
    4℃保存
    溶液为淡黄色。
    标准品
    粉剂×2
    4℃保存
    临用前:每支用前甩几下标准品
    管,使粉剂落入底部,再加入
    1mL 试 剂 一 混 匀 溶 解 , 即 得
    1mg/mL,再用试剂一稀释 100
    倍为 0.01mg/mL 溶液即为标准
    液(现配现用)
    三、所需的仪器和用品:
    可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿(光径 1cm)、研钵、冰、低温离心机、无水乙醇
    可调式移液器和蒸馏水。
    四、总抗坏血酸(TAA)含量测定:
    建议正式实验前选取 2 个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验
    样本和试剂浪费!
    1、样本制备:
    ① 组织样本:
    称取约 0.1g 组织(水分充足的果实样本取约 0.5g 组织或更多),加入 1mL 预先预冷的提
    取液,进行冰浴匀浆,室温静提 10min 后,12000rpm4℃离心 10min,取上清,置冰上
    待测。
    【注】:若增加样本,可按照组织质量(
    g):提取液体积(mL)15~10 的比例进行提取
    ② 液体样本:直接检测。若浑浊,离心后取上清检测。本试剂盒仅供科研使用
    2
    2、上机检测
    ① 可见分光光度计预热 30 min,调节波长到 534nm,蒸馏水调零。
    ② 取 0.1mL 上清液至新 EP 管中,加入 0.05mL 试剂 a 混匀,接着加入 0.4mL 试剂 b 混匀,
    (此时整体液体为中性:PH 7-8),室温(25℃)下反应 10min,之后再加 0.1mL 试剂
    c 混匀(此时整体液体为酸性:PH 1-2),此混合液为 TAA 待检液。
    ③ 依次在 EP 管中依次加入:
    试剂名称(
    μL) 测定管
    标准管
    (仅做一次)
    空白管
    (仅做一次)
    TAA 待检液
    300
    标准液
    300
    提取液
    300
    试剂一
    150
    150
    150
    无水乙醇
    150
    150
    150
    试剂二 B
    75
    75
    75
    试剂三
    150
    150
    150
    试剂四
    75
    75
    75
    混匀,于 30℃反应 60min 后,立即取全部澄清液体(若有
    沉淀需 8000rpm,室温离心 5min,取上清液)至 1mL 玻璃
    比色皿中,立即534nm 处读取各管吸光值 A
    【注】1.若提取完的样本上清液有较强的背景色(如粉色,红色等),需增设一个样本自身对照:
    即对照管为 300μL 样本+200μL 试剂一+200μL 无水乙醇+100μL 试剂二 B 液+300μL 无水乙
    醇,30℃反应 60min 后,剩余步骤同测定管,△A=A 测定-A 对照。
    2.若测定管大于 1.8,可对样本进行稀释 D,或降低样本量则试剂一相应增加。则稀释倍数
    D 或改变后的样本体积 V1 需代入公式重新计算。
    五、结果计算:
    1、按样本质量计算
    TAA (mg/g 鲜重) =[(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A空白)] ×(C 标准×V 标准)÷(W×V1÷V) ×6.5×D
    =0.01×(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)÷W×D
    3、按液体体积计算
    TAA (mg/mL) =[(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白)] ×(C 标准×V 标准)÷V1×6.5×D
    =0.01×(A 测定-A 空白) ÷(A 标准-A 空白) ×D
    V---加入提取液体积,1 mL
    V1--- TAA 待检液体积,0.3mL
    V 标准---加入标准液体积,0.3mL
    C 标准---标准液浓度,0.01mg/mL
    W---样品质量(
    g);
    D---稀释倍数,若没有稀释即为 1

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