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上海维亦特生物
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文献和实验【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统,影响蛋白表达的因素?
-6及阳性对照Bacmid/CAT,已构建成功。 2. 昆虫细胞Sf9、High Five及其相关培养基、转染试剂均购自Invitrogen公司。抗His单克隆抗体购自Oncogene公司,CAT-ELISA试剂盒购自 Roche。 实验步骤: 一、 昆虫细胞转染: 1. Sf9细胞计数,取6孔板中的两孔,每孔加入9×10 5个细胞(其中一孔设为正常对照),并以全培培养至少1小时,使细胞贴壁。 2. 准备重组质粒和细胞转染试剂的混合物: a. 溶解1μg纯化重组杆状
膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35-36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的PS结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生坏死的细胞其细胞膜上的PS也外翻,因而也会阳性。因此,常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外,还会加一种DNA染料,常用的有PI和7-AAD,由于坏死的细胞膜通透性增高,染料可以进入细胞内和DNA结合,从而可以发荧光,区分出坏死
昆虫(蚊、蛉、蚋、蠓等)可用00号短针自胸部腹面两中足基部之间插入,不可刺透胸背,再用另一长针从软木片另一端插下。最后各插一硬纸片,记录名称、采集地点与时间,并将之插于昆虫盒软木板上或玻璃管的软木塞上。昆虫盒内放入纸包的樟脑粉即可。如标本数量多(图22-9),可保存于塑料管(或玻璃管)中,管底放少量樟脑粉,再铺上棉花、滤纸各一层,昆虫标本放于滤纸上,用软棉纸包棉花,轻塞在昆虫标本上方,瓶口加软木塞,再以蜡封之。 图22-9 有翅昆虫针插法 2.湿标本保存用于保存
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