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- 文献和实验
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100+
- 供应商:
上海维亦特生物
- 规格:
48T/96T
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文献和实验; V 0 -原溶液的体积; S 1 -原溶液中有机溶剂的浓度 S 2 -要求达到的有机溶剂浓度; 100-指加入的有机溶剂浓度为100%。如所加入的有机溶剂的浓度为95%,上式(100一S2)项应改为(95一S2)。 在大规模制备沉淀时,若溶剂浓度的要求不太严格时,可用简单的交叉方法求出。 本实验采用有机溶剂沉淀法从肝匀桨中分离纯化碱性磷酸酶(简称AKP)。先用低浓度醋酸钠(低渗破模作用)制备肝匀浆。醋酸镁则有保护
主要方法。林一贝(Lineweaver—Burk)氏根据米—曼氏方程式又推导如下方程式: 以不同的底物浓度1/[S]为横坐标1/v为纵坐标,按直线回归方程计算,作图,并向纵轴方向延长,此线在横轴上截距为1/Km的负值。 本实验以碱性磷酸酶为例,选择不同浓度的磷酸苯二钠为其底物,磷酸苯二钠被AKP水解后,生成酚和磷酸,酚在碱性溶液中与4—氨基安替比林作用,经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物,根据红色的深浅可测出酶活力高低,其反应式如下
碱性磷酸酶检测法( AKP 法) 1. 按 MTT 法用细胞因子处理靶细胞适当时间,用 PBS 洗去死亡细胞,洗两次。 2. 向 96 孔细胞培养板各孔中加 0.2ml 新鲜配制的底物液( 0.2mol/L 硼酸, 1mmol/L MgCl2 , 1.2mmol/L 甲伞基磷酸)。在 37 ℃ 5 % CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养 3 小时。 3. 在荧光计数仪上测定荧光的量。根据测定已知
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