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100+
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上海维亦特生物
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48T/96T
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列,插入PET28A的BamH1和Hind3位点,最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明: 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中,但是该沉淀无色。 少量存在于上清中,上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达,目的蛋白在上清中,并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
蛋白;③含多个内部起始序列和多个终止转移序列 T多次跨膜的膜蛋白。 2. GFP的特性 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)是一种能够自身催化形成发色结构,并在蓝光或紫外光的激发下发出荧光的新型报告基因。GFP的发现及其研究迅速发展,使人们能够在正常生活条件下对活细胞内分子水平上进行的各种过程及其分子机理进行观察和研究。目前的研究表明,GFP能在多种生物,如细菌,酵母,植物及哺乳动物中
一、 GFP背景概述 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)最早由Osamu Shimomura于1962年在水母(Aequorea victoria)(图2a)中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光,其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,而且,这个冷光蛋白质可与钙离子(Ca2+)相互作用(图3)。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小,仅为27~30kDa,而编码GFP的基因序列也很短
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