Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒 绿色荧光 适

Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞周期的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些高效的检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。在正常细胞中，DNA密度的改变与细胞生长、分化、休眠等细胞功能相关。细胞周期通过许多不同的细胞周期调控因子相互作用来调节。这些调控因子，可以与DNA结合，开启或关闭那些能引起细胞分裂的蛋白质合成。在这个调控级联反应中，任何一步的错误都会引起细胞非正常地增殖，这是一种潜在的病理状态，例如肿瘤的形成。活细胞研究的潜在应用是对细胞DNA含量的测定和细胞周期进行检测，为了对细胞的生长模式的变化进行检测，对细胞凋亡进行监测，对肿瘤细胞活动和抑制剂基因机制进行研究。Cell Meter荧光法细胞周期检测试剂盒 *绿色荧光 适合于流式细胞检测* 是设计用来检测细胞周期进程和增殖的，在活细胞、经通透性处理的细胞和固定化细胞中使用我们独特的Nuclear Green CCS1对细胞周期进程和增殖进行监测。在所给样品的不同细胞中，有G0/G1, S 和G2/M 期以及细胞凋亡之前的亚-G1期等，可以通过流式细胞仪检测。经过Nuclear Green CC1染色的细胞可以通过流式细胞仪在Ex/Em = 490 nm/520 nm(FL1 通道)进行检测。，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞周期检测试剂盒。

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样品实验方案

简要概述

用测试化合物制备细胞，密度为5×10⁵至1×10⁶个细胞/ mL
将2.5μL200XNuclear Green CCS1加入0.5 mL细胞溶液中
在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30-60分钟
使用FL1通道用流式细胞仪分析细胞（（Ex / Em = 490/525 nm）

 

操作步骤

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中，密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡或其他细胞周期功能。

3.将2.5μL的200X Nuclear Green CCS1（组分A）加入处理过的细胞中。

4.将细胞在37°C，5％CO₂培养箱中孵育30至60分钟。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nuclear Green CCS1孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。由于Nuclear Green CCS1是细胞可渗透的，因此不必在DNA染色之前固定细胞。

5.可选：将细胞以1000 rpm离心4分钟，然后将细胞重新悬浮于0.5 mL测定缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测荧光强度。

 

数据分析

图1生长和诺考达唑处理的Jurkat细胞中的DNA谱。 Jurkat细胞在37℃，5％CO2培养箱中不用（A）或用100ng / ml诺考达唑（B）处理24小时，然后用Nuclear Green CCS1染色30分钟。 使用具有FITC通道的ACEA NovoCyte流式细胞仪测量Nuclear Green CCS1的荧光强度。 在生长Jurkat细胞（A）中，用Nuclear Green CCS1染色的核显示出G1，S和G2期。 在Nocodazole处理G2阻滞细胞（B）后，G2细胞频率急剧增加，G1期，S期频率明显下降。

 

参考文献

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